ChemiScreen 膜製剤 組換えヒト α_1B アドレナリン作動性 受容体

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

表1. さまざまな量の α_1B 受容体膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値。

	5 µ g/ウェル
シグナル：バックグラウンド	11.8
特異的結合（cpm）	1171

仕様：1 ユニット = 5 µg 膜製剤
[³H]-プラゾシン結合の B_max：12.9 pmol/mg タンパク質
[³H] -プラゾシン結合の K_d： ~0.8 nM

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合。

GPCR クラス：A

タンパク質標的：α1B

標的サブファミリー：アドレナリン作動性

メルクのカタログまたは製品に添付されたメルクのその他の文書に記載されていない場合、メルクの製品は研究用途のみを目的としているため、他のいかなる目的にも使用することはできません。このような目的としては、未承認の商業用途、in vitroの診断用途、ex vivoあるいはin vivoの治療用途、またはヒトあるいは動物へのあらゆる種類の消費あるいは適用などがありますが、これらに限定されません。

インキュベーション条件
アッセイ推奨条件：非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、FC 96 ウェル採取プレート（Millipore カタログ番号 MAHF C1H）を 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50 mM トリス、pH 7.4 で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。

結合緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、10 mM MgCl₂、1 mM EDTA、ろ過後、4°C で保存

放射性リガンド：[³H]-プラゾシン。（Perkin Elmer # NET823）

洗浄緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、500 mM NaCl。0.1% BSA ろ過後、4°Cで保存。

各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、1 nM の³H 標識プラゾシンで 5 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

アドレナリン作動性 α_1B をコードする全長ヒト ADRA1B cDNA

内因性カテコールアミンであるエピネフリンとノルエピネフリンは、平滑筋活動、心機能、炭水化物や脂肪の代謝、ホルモン分泌、神経伝達物質の放出、中枢神経系の作用に大きな影響を与えます。 これらの活性は、α アドレナリン受容体および β　アドレナリン受容体という 2 つのサブファミリーに属する GPCR によって媒介されます（Bylund et al., 1994）。 アドレナリン受容体のうち α1 サブクラスに属する3種類、α_1A、α_1B および α_1D は Gq に結合し、血管および尿路平滑筋の収縮、腸平滑筋の弛緩、心臓における収縮力の増大、肝臓におけるグリコーゲン分解および糖新生を促進します。 異なるサブタイプが重複して分布し、生物種や組織によってこれらの作用にさまざまに関与しています。トランスジェニックマウスの心臓で構成的に活性な α_1B 変異体を過剰発現させると、心肥大が起こり、心臓重量対体重比が増加しました。 α_1B ノックアウトマウスの分析から、α_1B が α₁ アゴニストによって誘発される、血圧や大動脈収縮反応の媒介因子であるという証拠が得られています（Milano et al., 1994）。α_1B アドレナリン受容体を欠損したマウスでは、精神刺激薬やオピエートの運動効果や報酬効果が抑制されました（Drouin et al. 2002）。Millipore′のα_1B 膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、α_1B のアゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。 この膜製剤は [³H]-プラゾシンに対して 0.8 nM の Kd を示します。 1 nM の [³H]-プラゾシンで、5μg/ウェルの α_1B 膜製剤は、通常 5 倍以上のシグナル/バックグラウンド比を示します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。
包装方法：膜タンパク質は 1 mL の包装緩衝液で 1 mg/mL に調整し、急速凍結して -80°C で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。