Análisis de fármaco total para estudios farmacocinéticos
MultiScreen® Deep Well and MultiScreen Solvinert Filter Plates
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Referencias bibliográficas
| Visión general referencias | Aplicación |
|---|---|
| LC–MS-MS Total Drug Analysis of Biological Samples Using a High-Throughput Protein Precipitation Method Bogdan Sleczka, Jian Wang, and Timothy Olah, Bristol-Myers Squibb Bioanalytical and Discovery Analytical Sciences, Princeton, New Jersey LC-GC, Volume 24 Number 7 July 2006 2005 | |
| Assessment of filter plates for multi-well in-gel digestion of proteins separated by polyacrylamide gel elelctrophoresis to identify them with LC-ESI/MSMS Kazuhisa Kameyama, Tomohiro Nanri, Yuko Yamanaka, Mikikio Arima, Hiroshi Kawasaki Journal Electrophoresis. 2005; 49, 71-75 2004 | Mass Spectrometry |
Preguntas frecuentes
| Pregunta | Respuesta |
|---|---|
| What is the maximum volume that should be used with the MultiScreen Deep Well filter plate? | The maximum recommended volume to be used with the MultiScreen Deep Well filter plate is 1.8 mL (1.5 mL with shaking). |
| Should the MultiScreen Solvinert Deep Well plate be used with vacuum or centrifuge? | The MultiScreen Solvinert Deep Well plate with both vacuum and centrifuge. However, vacuum should not be used with volitile solvents (e.g., TFA). |
| At what g force should the MultiScreen Solvinert Deep Well plates be spun? | The MultiScreen Solvinert Deep Well plates should be spun at 500-3,000 x g. |
| What is the active membrane surface area of the MultiScreen Solvinert Deep Well plate? | The active membrane surface area of the MultiScreen Solvinert Deep Well plate is 0.28cm2. |
| What is the extractables level for the MultiScreen Solvinert Deep Well filter plate? | The extractables level of the MultiScreen Solvinert Deep Well plates is extremely low, making this product ideal for processing samples to be analyzed by HPLC or LC/MS/MS. |
| When I wet out the membranes in the MultiScreen Solvinert Deep Well plate they become translucent. Is this normal? | Yes, this is completely normal and expected. |
| Is the MultiScreen Solvinert Deep Well plate automation compatible? | Yes, the MultiScreen Solvinert Deep Well plate is automation compatible. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well for Total Drug Analysis, can I add the serum all at once to each well? Why do I have to drip the serum in slowly for the manual procedure? | Slow addition of the serum to each well allows for maximum surface area exposure of the plasma with the acetonitrile. Subsequent mixing of the solution provides for complete dispersion of the plasma into the acetonitrile thus allowing complete protein precipitation. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well for Total Drug Analysis, why does the protocol require 90% acetonitrile? Can I use 100% acetonitrile? | The specific density of acetonitrile and plasma are rather different, which can lead to incomplete mixing. Prewetting of the acetonitriile with 10% water improves mixing and allows for complete integration of the plasma/serum into the acetonitrile. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well plate for Total Drug Analysis, how fast should I shake the plate after adding the serum/plasma and acetonitrile to each well? At what setting should my plate shaker be set? | It is recommended to shake the plate as fast as possible without spilling the solution from the wells. With the clear wells of the Solvinert Deep Well plate it is easy to see the level of the solution in the wells as it shakes. Simply turn the dial of the plate shaker up until the solution is approaching the top of the wells. It has been our experience that plate shakers can have different gauge settings, and even the same setting on different plates can have different actual rates. |
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| Life Science Research > Cell Culture and Systems > Cell Culture Flasks, Plates, & Slides > Multiwell Plates |
La determinación de la concentración de fármaco en plasma o en suero a diferentes tiempos tras su administración es necesaria para evaluar la farmacocinética (PK) de dicho fármaco. La PK, a su vez, es un componente importante en el perfil de absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME). El conocimiento preciso de las propiedades ADME permite la determinación de la dosis adecuada de fármaco para mantener niveles terapéuticos sin el riesgo de efectos tóxicos.
Las placas MultiScreen Deep Well Solvinert y MultiScreen Solvinert han sido validadas para la precipitación en placa de proteínas plasmáticas o séricas en análisis de fármaco total. Las placas permiten la transferencia rápida y completa del filtrado proporcionando una plataforma compatible con los sistemas de automatización para la preparación de muestras antes del análisis de fármaco total. La filtración con la familia de placas Solvinert proporciona un filtrado libre de proteína que es compatible con el análisis HPLC-MS o HPLC-UV.
Las placas MultiScreen Deep Well y MultiScreen Solvinert son plataformas fiables y robustas que generan resultados reproducibles. Las muestras aisladas a partir de suero mediante precipitación de proteínas y filtración a través de estas placas se encuentran libres de proteínas y muestran una elevada recuperación de los compuestos y ninguna interferencia por extraíbles.
Las placas de filtración MultiScreen Deep Well Solvinert compatibles con sistemas de automatización ofrecen resultados reproducibles para la determinación de fármaco total
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Se agregó warfarina a muestras de suero bovino seguido de la precipitación de proteínas y la filtración a través de placas MultiScreen Deep Well Solvinert. El ensayo se realizó tanto manualmente como de forma totalmente automatizada. Se analizaron las concentraciones de fármaco en los filtrados mediante LC-MS/MS y se compararon. La linealidad de los resultados en ambos métodos, manual y automático, (valores R2 = 0,999) demuestra que las muestras de fármaco en suero pueden prepararse de forma manual o automática de manera fiable mediante precipitación y filtración en placas de filtración MultiScreen Deep Well Solvinert. El elevado grado de linealidad indica que los filtrados generados siguiendo este procedimiento permiten el análisis LC-MS/MS para un amplio rango de concentraciones.
Diseños de placas de alto rendimiento
Las placas de filtración MultiScreen Solvinert compatibles con sistemas de automatización están disponibles en formato Deep Well de 96 pocillos (2 ml) y en formato estándar (500 µl). El diseño de las placas de una sola pieza incorpora paredes laterales rígidas para facilitar su uso con brazos robotizados y proporcionan espacio para las etiquetas del código de barras.
Todos los materiales de las placas MultiScreen Solvinert se han seleccionado para una elevada compatibilidad química y permitir incubaciones prolongadas en la placa sin riesgo de fugas.
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Optimizadas para Drug Discovery y la preparación de muestras para HPLC
Las placas MultiScreen Solvinert, de pocillo profundo y estándar, se han optimizado para las aplicaciones de Drug Discovery, incluyendo análisis de fármaco total, y la preparación de muestras antes del análisis mediante HPLC o LC/MS/MS. Las placas y membranas muestran baja adsorción, bajos niveles de extraíbles y una alta recuperación. Para separaciones cromatográficas, puede utilizarse el Cargador de Columnas MultiScreen para crear 96 minicolumnas por placa.
La placa MultiScreen Deep Well con membrana hidrófoba y prefiltro también está indicada para el análisis de fármaco total en plasma mediante precipitación de proteínas.
Existen membranas hidrófilas e hidrófobas de PTFE
Las placas de filtración MultiScreen Solvinert están disponibles con membranas hidrófilas e hidrófobas de alta compatibilidad química para trabajar con muestras acuosas y no acuosas. Las placas de filtración MultiScreen Deep Well Solvinert también están disponibles con un prefiltro opcional para usar con medios con alto contenido en partículas. Ambas membranas poseen una elevada retención (retención de BSA precipitado con ácido >99%).
Para obtener la máxima resistencia química, se recomienda la membrana hidrófoba de PTFE. Diseñada para incubaciones prolongadas y niveles mínimos de extraíbles, la membrana hidrófoba de PTFE es ideal para la escisión y purificación de NCE. También resulta idónea para la precipitación de proteínas en placa y la recuperación de la muestra tras la escisión de sólidos o "beads" del compuesto en placa. Las placas también pueden utilizarse para la síntesis de péptidos.
La membrana hidrófila de PTFE está optimizada para una baja adsorción de fármacos y proteínas con excelentes rendimientos en preparaciones de muestras con disolventes y preparaciones acuosas típicas. Las altas recuperaciones de la muestra y los bajos niveles de extraíbles permiten un análisis óptimo por HPLC y LC/MS/MS. La membrana está diseñada para aplicaciones, que incluyen el screening de productos naturales, ensayo de solubilidad acuosa y el análisis de fármaco total.
Rendimiento
Altas recuperaciones de fármaco en preparaciones con disolventes
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90%) tanto para las placas MultiScreen Solvinert hidrófilas como hidrófobas. (La muestra se precipitó previamente mediante la adición de CACN seguido de un mezclado vigoroso). Se han observado resultados equivalentes con las placas de filtración MultiScreen Deep Well Solvinert." />
Se analizó el porcentaje de recuperación de siete fármacos mediante precipitación plasmática con acetonitrilo. Se añadió fármaco (stock 100 µM y tritado) a muestras de plasma (5 ml) hasta una concentración final de fármaco de 5 µM seguido de una hora de incubación. La proteína precipitó al añadir acetonitrilo (15 ml) y se agitó vigorosamente la solución en un vórtex. Para cada fármaco, se añadió una alícuota de 300 µl del sobrenadante a 8 pocillos por cada placa. Las muestras se filtraron a vacío (12" Hg) y se recogieron los filtrados. Se determinó el porcentaje de recuperación al comparar una alícuota (100 µl) de filtrado con una alícuota del stock precipitado (cpm filtrado/cpm stock precipitado). Los resultados mostraron una recuperación excelente de fármaco (>90%) tanto para las placas MultiScreen Solvinert hidrófilas como hidrófobas. (La muestra se precipitó previamente mediante la adición de CACN seguido de un mezclado vigoroso). Se han observado resultados equivalentes con las placas de filtración MultiScreen Deep Well Solvinert.
Nota: La tapa de almacenamiento no tiene las mismas propiedades de resistencia a disolventes que la placa de filtración y puede dañarse con la exposición a los vapores de algunos disolventes.
*No se recomienda usar dioxano, hexano ni benzeno en las placas Deep Well
Los datos presentados en esta tabla son una compilación de los ensayos realizados por Millipore con determinadas sustancias químicas y recomendaciones de compatibilidad de los fabricantes. Estos datos están indicados para ofrecer los resultados esperados cuando se exponen los dispositivos de filtración a las sustancias químicas durante 48 horas a 25 °C, a menos que se indique lo contrario.
| Incubaciones prolongadas sin fugas | ||
| Solución | Rendimiento de la incubación durante 24 horas | |
| Membrana PTFE hidrófila |
Membrana PTFE hidrófoba |
|
| Agua Milli-Q 18 MΩ | R | R |
| EtOH, 100% | R | R |
| MeOH, 100% | R | R |
| MeCl2 | NR | R |
| DMSO/PBS (5%/95% v/v) | R | R |
| ACN, 100% | R | R |
| ACN/H2O (75%/25% v/v) | R | R |
| TFA/ACN (80%/20% v/v) | NR | R |
| DMSO, 100% | R | R |
| DMF, 100% | R | R |
| NaOH, 1,75 N | R | R |
| R = Recomendado NR = No recomendado. Algunos pocilos mostraron goteo parcial o completo en el ensayo de 24 horas. Podrían ser compatibles para tiempos de incubación más cortos. |
||
Tabla 2. Las placas de filtración MultiScreen Solvinert están diseñadas para soportar incubaciones largas. Esta tabla de compatibilidad con disolventes muestra los resultados obtenidos para 200 µl de líquido con 24 horas de incubación a temperatura ambiente.
| Placas de filtración | MultiScreen Deep Well Solvinert | MultiScreen Solvinert |
| Volumen de muestra por pocillo | ||
| Recomendado, ml | 50 µl - 1,8 ml | 50 µl - 0,45 ml |
| Maximo, ml | 1.9 mL | 0.5 mL |
| Parámetros de filtración | ||
| Fuerza centrífuga relativa | Fuerza centrífuga máxima 3.000 g | Fuerza centrífuga máxima 3.000 g |
| Vacío máximo, mm Hg ("HG) | 610 (24) | 610 (24) |
| Materiales | ||
| Base de la placa | Copolímero de poliolefina | Copolímero de poliolefina |
| Membrana | PTFE hidrófilo | PTFE hidrófilo |
| o | PTFE hidrófobo | PTFE hidrófobo |
| Prefiltro | Polipropileno (opcional) | N/D |
| Dimensiones | ||
| Área de membrana, cm2 | 0.28 cm² | 0.28 cm² |
| Longitud de la placa, mm | 128 mm | 128 mm |
| Anchura de la placa, mm | 85.5 mm | 85.5 mm |
| Profundidad de la placa, mm | 40.7 mm | 14.6 mm |