| Columna | Columna para HPLC Purospher® STAR RP-18 desactivada (5 µm) LiChroCART® 150-4,6 |
|---|---|
| Fase móvil | Metanol / Agua 80:20 |
| Caudal | 1,0 ml/min |
| Detección | UV 254 nm |
| Temperatura | 30° C |
| Volumen de inyección |
10 μl |
| Muestra | 1. Uracilo 2. Butilbenceno 3. o-Terfenilo 4. Pentilbenceno 5. Trifenileno |
 |
Prueba de Tanaka |
Caracterización cromatográfica de las propiedades de las columnas
Es importante controlar las propiedades físicas y químicas de las fases estacionarias. Sin embargo, solo una caracterización cromatográfica completa asegura un nivel de reproducibilidad constantemente elevado. Por consiguiente, los científicos especializados en HPLC han aplicado varios enfoques para caracterizar la selectividad.
La prueba de Tanaka* está establecida en todo el mundo como la referencia de la industria para evaluar la selectividad y el rendimiento de las diferentes columnas de HPLC. Estos parámetros no solo simplifican la comparación de las columnas, sino que también facilitan la selección de la columna de HPLC más adecuada para una separación concreta.
Se utiliza un conjunto de siete sustancias seleccionadas para describir la capacidad, la hidrofobicidad, la selectividad estérica y las propiedades silanófilas. Los valores de esos parámetros se representan en los seis ejes de un hexágono, ilustrando de un vistazo la calidad de un adsorbente.
Cuanto más simétrico sea el hexágono y mayor su área, más equilibrada será la suma de las propiedades cromatográficas de la fase estacionaria.
* Prof. Tanaka, Kyoto Institute of Technology, J. of Chrom. Sci. 27, 725, 1989
Parámetros para la caracterización de los adsorbentes de HPLC Purospher® según Tanaka
| Parámetros | Propiedad de la fase estacionaria | Factores que intervienen en la preparación de la fase estacionaria | |
|---|---|---|---|
| k (Pentilbenceno) Metanol al 80 % |
Capacidad de retención (A) |
Cantidad de cadenas alquilo | Superficie de sílice Cobertura de sílice |
| k (Pentilbenceno) / k (Butilbenceno) Metanol al 80 % |
Hidrofobicidad (B) | Capacidad hidrófoba Selectividad para el grupo CH2 |
Cobertura de superficie |
| k (Trifenileno) / k (o-Terfenilo) Metanol al 80 % |
Selectividad estérica (C) | Selectividad estérica (forma) | Funcionalidad silano Cobertura de superficie |
| k (Cafeína) / k (Fenol) Metanol al 30 % |
Capacidad silanol (D) | Capacidad silanol (contenido y tipo de silanoles) | Silanoles residuales Protección Cobertura de superficie |
| k (Benzilamina) / k (Fenol) Metanol al 30 % / Tampón fosfato al 70 % (pH 7,6) |
Capacidad de intercambio iónico (E) | Capacidad de intercambio iónico a pH 7 |
Silanoles residuales Sitios activos a pH 7 |
| k (Benzilamina) / k (Fenol) Metanol al 30 % / Tampón fosfato al 70 % (pH 2,7) |
Capacidad de intercambio iónico (F) | Capacidad de intercambio iónico a pH 3 |
Sitios activos a pH 3 Tratamiento de sílice básica (impurezas metálicas) |
Pruebas de Tanaka para Purospher® STAR RP-8 desactivada
Tanaka 1: Capacidad de retención, hidrofobicidad, selectividad estérica
La prueba de Tanaka describe la capacidad de retención, la hidrofobicidad y la selectividad estérica de las fases RP.
Tanaka 2: Capacidad silanol
La prueba de Tanaka 2 (Cromatograma A) ilustra las propiedades silanófilas de las fases estacionarias. El cromatograma B no forma parte de la prueba de Tanaka 2. La prueba fenol/piridina mide las actividades silanol.
Tanaka 3 y 4: Capacidades de intercambio iónico
Los resultados obtenidos de la prueba de Tanaka 3 (a bajo pH) demuestran si la desactivación de los grupos silanol residuales es completa. La prueba de Tanaka 4 (a pH elevado) indica la ausencia completa de metal en el adsorbente de base.
Resultados de la prueba de Tanaka para Purospher® STAR RP-8 desactivada
Comparada con otras marcas de columnas RP-18 desactivadas de "gran pureza", la Purospher® STAR RP-18 desactivada demuestra la mejor selectividad global, lo que hace de ella la columna de elección para conseguir buenas separaciones mediante HPLC.
| A. | K (Pentilbenceno) | 9,59 |
| B. | α (Pentil-/ Butilbenceno) | 1,51 |
| C. | α (Trifenileno/ o-Terfenilo) | 1,63 |
| D. | α (Cafeína/ Fenol) | 0,44 |
| E. | α (Benzilamina/ Fenol; pH 7,6) | 0,23 |
| F. | α (Benzilamina/ Fenol; pH 2,7) | 0,02 |
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