Prueba de Engelhardt

Hidrofobicidad y actividades silanólicas de las fases estacionarias Purospher®

La prueba de Engelhardt se realizó en varias fases estacionarias Purospher® para verificar sus selectividades. Esta prueba de 8 compuestos, desarrollada por el equipo de Engelhardt*, se ha convertido en uno de los procedimientos de referencia para evaluar la hidrofobicidad y la actividad silanófila de los rellenos de las columnas de fase inversa. El tolueno y el etilbenceno demuestran propiedades hidrófobas, mientras que el fenol y el etilbenzoato establecen interacciones polares neutras. El comportamiento crítico hacia los compuestos básicos se evalúa mediante la inyección de 5 diferentes anilinas. Si hay una buena supresión de la actividad silanólica de la fase estacionaria, la anilina eluye antes del fenol, con una excelente forma del pico, y los isómeros geométricos de la etilanilina co-eluyen.

* Engelhardt et al., Chromatographia 29, 59, 1990

Purospher® RP-18

Debido a la protección amino de la Purospher® RP-18 y a las interacciones polares con los analitos, no pudo observarse co-elución de los isómeros geométricos de (p-, m-, o-) etilanilina (4). Ambas anilinas (2, 5) eluyen como picos simétricos, indicando así la excelente idoneidad de la Purospher® RP-18 para la separación de analitos básicos fuertes.

Prueba de Engelhardt de Purospher® RP-18

Columna	Columnas para HPLC Purospher® RP-18 (5 µm) LiChroCART® 125-4
Fase móvil	Metanol / agua 55/45 (v/v)
Caudal	1,0 ml/min
Temperatura	ambiente
Detección	UV 254 nm
Muestra	1. Tiourea 2. Anilina 3. Fenol 4. p-etilanilina, m-etilanilina, o-etilanilina 5. N,N-Dimetilanilina 6. Etilbenzoato 7. Tolueno 8. Etilbenceno	a básica ácido básica básica neutro neutro neutro

Purospher® RP-18 desactivada

Dado que no hay interacciones polares en la superficie, la Purospher® RP-18 desactivada muestra una perfecta co-elución de la p-etilanilina, la m-etilanilina y la o-etilanilina (4). Las dos anilinas (2, 5) eluyen con una forma de pico simétrico, lo que demuestra una idoneidad excelente para la separación de analitos básicos fuertes. El elevado tiempo de retención del etilbenceno (8) indica la hidrofobicidad de la fase estacionaria.

Prueba de Engelhardt de Purospher® RP-18 desactivada

Columna	Columna para HPLC Purospher® RP-18 desactivada (5 µm) LiChroCART® 125-4
Fase móvil	Metanol / agua 55/45 (v/v)
Caudal	1,0 ml/min
Temperatura	ambiente
Detección	UV 254 nm
Muestra	1. Tiourea 2. Anilina 3. Fenol 4. p-etilanilina, m-etilanilina, o-etilanilina 5. N,N-Dimetilanilina 6. Etilbenzoato 7. Tolueno 8. Etilbenceno	a básica ácido básica básica neutro neutro neutro

Purospher® STAR RP-18 desactivada

La Purospher® STAR RP-18 desactivada muestra una perfecta co-elución de la p-etilanilina, la m-etilanilina y la o-etilanilina (4), lo que indica ausencia de interacciones polares debido a actividad silanol en la superficie. Las dos anilinas (2, 5) eluyen simétricamente, lo que demuestra una idoneidad excelente para la separación de compuestos básicos fuertes. La Purospher® STAR RP-18 desactivada exhibe una selectividad similar a la de la columna Purospher® RP-18 desactivada, pero tiene un mayor intervalo de pH.

Prueba de Engelhardt de Purospher® STAR RP-18 desactivada

Prueba de Engelhardt de Purospher® STAR RP-18 desactivada

Columna	Purospher® STAR RP-18 desactivada (5 µm)
Fase móvil	Metanol / agua 55/45 (v/v)
Caudal	1,0 ml/min
Temperatura	TA
Detección	UV 254 nm
Muestra	1. Tiourea 2. Anilina 3. Fenol 4. p-etilanilina, m-etilanilina, o-etilanilina 5. N,N-Dimetilanilina 6. Etilbenzoato 7. Tolueno 8. Etilbenceno	a básica ácido básica básica neutro neutro neutro

Purospher® RP-18 HC

Como no hay protección de la fase ligada, Purospher® RP-18 HC muestra interacciones polares muy claras con los silanoles residuales en la superficie. La anilina y el fenol (2,3) eluyen en un mismo pico, mientras que los compuestos básicos demuestran una mayor retención, pero pérdida de resolución. Por consiguiente, esta columna es adecuada para la separación de analitos polares, no básicos, como los explosivos.

Prueba de Engelhardt de Purospher® RP-18 HC

Columna	Columna para HPLC Purospher® RP-18 HC (5 µm) LiChroCART® 125-4
Fase móvil	Metanol / agua 55/45 (v/v)
Caudal	1,0 ml/min
Temperatura	TA
Detección	UV 254 nm
Muestra	1. Tiourea 2. Anilina 3. Fenol 4. p-etilanilina, m-etilanilina, o-etilanilina 5. N,N-Dimetilanilina 6. Etilbenzoato 7. Tolueno 8. Etilbenceno	a básica ácido básica básica neutro neutro neutro

Purospher® STAR RP-8 Desactivada

Dado que hay interacciones polares debido a la fina capa de cobertura hidrófoba con cadenas C8 cortas, la columna Purospher® STAR RP-18 desactivada no muestra co-elución de la p-etilanilina, la m-etilanilina y la o-etilanilina (4). Las anilinas (2, 5) eluyen como picos simétricos, lo que demuestra una muy buena idoneidad para la separación de compuestos básicos fuertes. El etilbenzoato (6) y el tolueno (7) eluyen en un solo pico, lo que es habitual para las fases C-8.

Prueba de Engelhardt de Purospher® STAR RP-18 desactivada

Columna	Purospher® STAR RP-8 desactivada Columnas para HPLC LiChroCART® 125-4 (5 µm)
Fase móvil	Metanol / agua 55/45 (v/v)
Caudal	1,0 ml/min
Temperatura	TA
Detección	UV 254 nm
Muestra	1. Tiourea 2. Anilina 3. Fenol 4. p-etilanilina, m-etilanilina, o-etilanilina 5. N,N-Dimetilanilina 6. Etilbenzoato 7. Tolueno 8. Etilbenceno	a básica ácido básica básica neutro neutro neutro

Propiedades cromatográficas de las fases estacionarias Purospher®