Kit de 96 pocillos para preparación de plásmidos y BAC
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Especificaciones
Información para pedidos
Documentation
Preguntas frecuentes
| Pregunta | Respuesta |
|---|---|
| What is holdup volume of a MultiScreen Plate used with the Montage Kits? | The holdup volume for the MultiScreen plate is between 5-20 microliters. |
| When using the Montage kits how can I tell when filtration in the MultiScreen plate is complete? | Filtration is complete when the individual wells of the MultiScreen plate are empty and the membranes appear shiny. |
| The two sections of the MultiScreen plates used in the Montage kits are separating under vacuum. Why? | The most common reason for this problem is the lack of a MultiScreen underdrain support grid in the vacuum manifold. A MultiScreen support grid is required for proper functioning of the MultiScreen plate with any vacuum manifold. |
| The total yields with the Montage Plasmid Miniprep-96 kit seems to be less then with competitive products. Why? | The Montage kit uses less culture volume (1ml vs. 1.3 ml) than most competitive kits. However the relative yield is equivalent. |
| What is the total processing time for plasmid preparation using the Montage kits? | Processing time depends on viscosity of sample, number of manifolds, familiarity with protocol, temperature. (Also, need vacuum capable of 24 in Hg or 812.7 millibar, 609.6 torr.) |
| Can the culture block in the Montage 96 Plasmid prep be autoclaved? | Yes. |
| What is the 260/280 assessment ratio when using the Montage Plasmid Kit? | The 260/280 reading is 1.8-2.0. This signifies and extremely high level of purity. |
| Can I use this kit in centrifugal mode? | Use of the Montage Plasmid Miniprep-96 Kit in a centrifugal protocol is not recommended. |
| I'm using your two plate plasmid prep protocol and the wells are overflowing when I transfer the cleared lysate to the FB plate. What am I doing wrong? | Overflowing can result from any of the following:
|
| I have observed RNA contamination of my plasmid preps. Why? | Failure to add RNase A to solution 1 will often result in RNA contamination in your DNA miniprep. |
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Categorías
El kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" es un kit rápido y sencillo de utilizar para minipreparaciones de plásmidos de alta pureza y cromosomas artificiales bacterianos (BAC). Usando una tecnología patentada de separación, el kit Montage sigue un protocolo sencillo que elimina los largos métodos de adsorción/elución y los pasos de centrifugación para obtener ADN limpio y de forma reproducible en la mitad de tiempo que los métodos tradicionales.
Las muestras PCR purificadas están indicadas para la mayoría de las aplicaciones posteriores, incluyendo clonación, secuenciación de ADN y transformación. Las aplicaciones BAC incluyen secuenciación, fingerprinting, arraying y amplificación por PCR.
El kit incluye todos los reactivos y materiales desechables necesarios para purificar ADN plasmídico o ADN BAC en un formato de placas de 96 pocillos. Después de la lisis bacteriana, sólo se requieren tres pasos cortos de filtración para preparar 96 muestras de ADN limpias de cada placa.
El kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" es ideal para usar con los manipuladores automáticos de líquidos. La recogida de la muestra purificada desde la parte superior de la placa y la eliminación de largos pasos de centrifugación aumenta la compatibilidad del kit con una amplia gama de sistemas de automatización.
- No se requieren pasos de centrifugación ni de precipitación
- Tiempo mínimo de procesado
- Excelente pureza, rendimiento y reproducibilidad
- Compatible con automatización
Componentes del kit
| Pieza | Función |
| Placa de cultivo de 96 pocillos | Deep Well |
| Placa de plásmido | Purificación de ADN plásmido |
| Placa | clearing |
| Placa de almacenamiento con fondo en V | Almacenamiento de muestras de ADN plasmídico |
| Hoja de sellado | Sellado de placa de almacenamiento con fondo en V |
| RNasa A | Aditivo necesario para Solución 1 |
| Solución 1 | Resuspensión celular |
| Solución 2 | Lisis celular |
| Solución 3 | Neutralización |
| Solución 4 | Lavado |
| Solución 5 | Resuspensión/almacenamiento de ADN plasmídico |
| Sello de aluminio | Placas de sellado durante el crecimiento (deben estar perforadas) |
| Para más información sobre los componentes del kit, consulte el manual de funcionamiento del kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" o visite www.millipore.com/montage. | |
Protocolo para la minipreparacón de ADN plasmídico
Para el protocolo del ADN BAC, consulte la guía del usuario del kit Montage "Plasmid MiniprepHTS", P36315
)
| 1. | Después de la lisis bacteriana, transferir los lisados del bloque de cultivo de pocillos profundos a una placa clearing. Filtrar lisados en la placa de filtración "Plasmid" mediante vacío. |
| 2. | Mover la placa "Plasmid" a la parte superior del colector y aplicar vacío durante 5 a 7 minutos para concentrar la muestra. El ADN plásmido queda retenido en la superficie de la membrana mientras que los contaminantes se filtran hasta el recipiente para desechos. Añadir solución de lavado y filtrar durante 3 a 5 minutos. |
| 3. | Añadir tampón de resuspensión y recoger la muestra purificada por aspiración. |
| 4. | Transferir las muestras a la placa con fondo en V para usarlas o almacenarlas. |
Rendimiento — ADN plasmídico
Alta calidad
)
HTS 96" (PM-lambda digerido con Hind III)." />
El gel de agarosa muestra la calidad y uniformidad del ADN plasmídico purificado usando el kit Montage "MiniprepHTS 96" (PM-lambda digerido con Hind III).
| Altos rendimientos* | ||
| Cepa huésped | Plásmido | Rendimiento (µg) |
| XL 1-blue | pUC19 | 2,1 – 6,1 |
| pLH2** | 3,5 – 9,2 | |
| XL 1-blue | pUC19 | 2,4 – 6,4 |
| pLH2** | 3,5 – 9,1 | |
| *Los resultados variarán dependiendo de la cepa huésped, el plásmido y las condiciones del protocolo. **pLH2 procedía de pUC19. El fragmento de 2,0 Kb de bacteriófago λ digerido con Hind III se clonó en el sitio de corte de Hind III en pUC19, resultando en un plásmido de 4,7 Kb. |
||
| Resultados fiables | |||
| Cepa huésped | Plásmido | Longitud promedio de lectura (n=24; exactitud >98%) |
Phred promedio q >20 bases (n = 24) |
| XL1-azul | pUC19 | 707 | 618 |
| pLH2 | 658 | 623 | |
| JM109 | pUC19 | 706 | 602 |
| pLH2 | 695 | 543 | |
| Datos de secuencias de plásmidos preparados con el kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" para minipreparaciones de plásmidos. Todas las muestras se secuenciaron usando la química de secuenciación Big Dye y se analizaron en un secuenciador capilar MegaBACE®. Se usaron 160 ng de pLH2 y 100 ng de pUC19 en las respectiva reacciones. Las reacciones se purificaron con el kit Montage SEQ384. |
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Rendimiento— ADN BAC
ADN cromosómico
)
HTS 96" y se sometió a electroforesis en un gel de agarosa al 0,8% durante 120 min a 100 V, sin digerir (líneas 1 – 3) o después de la digestión con Not I (líneas 4 – 6) o Hind III (líneas 7 – 9). La línea M es ADN del bacteriófago Lamda digerido con Hind III. El ADN BAC purificado con el kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" es adecuado para fingerprinting." />
Se purificó el ADN de tres clones BAC diferentes de una "library" de ADN BAC del cromosoma 22 humano (Research Genetics, Inc.) con el kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" y se sometió a electroforesis en un gel de agarosa al 0,8% durante 120 min a 100 V, sin digerir (líneas 1 – 3) o después de la digestión con Not I (líneas 4 – 6) o Hind III (líneas 7 – 9). La línea M es ADN del bacteriófago Lamda digerido con Hind III. El ADN BAC purificado con el kit Montage "Plasmid MiniprepHTS 96" es adecuado para fingerprinting.