薬物動態試験のための薬剤総分析
MultiScreen® Deep Well and MultiScreen Solvinert Filter Plates
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Documentation
参考資料
| 参考資料の概要 | アプリケーション |
|---|---|
| LC–MS-MS Total Drug Analysis of Biological Samples Using a High-Throughput Protein Precipitation Method Bogdan Sleczka, Jian Wang, and Timothy Olah, Bristol-Myers Squibb Bioanalytical and Discovery Analytical Sciences, Princeton, New Jersey LC-GC, Volume 24 Number 7 July 2006 2006 | |
| Assessment of filter plates for multi-well in-gel digestion of proteins separated by polyacrylamide gel elelctrophoresis to identify them with LC-ESI/MSMS Kazuhisa Kameyama, Tomohiro Nanri, Yuko Yamanaka, Mikikio Arima, Hiroshi Kawasaki Journal Electrophoresis. 2005; 49, 71-75 2005 | Mass Spectrometry |
FAQ（よくある質問と回答）
| 質問 | 回答 |
|---|---|
| What is the maximum volume that should be used with the MultiScreen Deep Well filter plate? | The maximum recommended volume to be used with the MultiScreen Deep Well filter plate is 1.8 mL (1.5 mL with shaking). |
| Should the MultiScreen Solvinert Deep Well plate be used with vacuum or centrifuge? | The MultiScreen Solvinert Deep Well plate with both vacuum and centrifuge. However, vacuum should not be used with volitile solvents (e.g., TFA). |
| At what g force should the MultiScreen Solvinert Deep Well plates be spun? | The MultiScreen Solvinert Deep Well plates should be spun at 500-3,000 x g. |
| What is the active membrane surface area of the MultiScreen Solvinert Deep Well plate? | The active membrane surface area of the MultiScreen Solvinert Deep Well plate is 0.28cm2. |
| What is the extractables level for the MultiScreen Solvinert Deep Well filter plate? | The extractables level of the MultiScreen Solvinert Deep Well plates is extremely low, making this product ideal for processing samples to be analyzed by HPLC or LC/MS/MS. |
| When I wet out the membranes in the MultiScreen Solvinert Deep Well plate they become translucent. Is this normal? | Yes, this is completely normal and expected. |
| Is the MultiScreen Solvinert Deep Well plate automation compatible? | Yes, the MultiScreen Solvinert Deep Well plate is automation compatible. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well for Total Drug Analysis, can I add the serum all at once to each well? Why do I have to drip the serum in slowly for the manual procedure? | Slow addition of the serum to each well allows for maximum surface area exposure of the plasma with the acetonitrile. Subsequent mixing of the solution provides for complete dispersion of the plasma into the acetonitrile thus allowing complete protein precipitation. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well for Total Drug Analysis, why does the protocol require 90% acetonitrile? Can I use 100% acetonitrile? | The specific density of acetonitrile and plasma are rather different, which can lead to incomplete mixing. Prewetting of the acetonitriile with 10% water improves mixing and allows for complete integration of the plasma/serum into the acetonitrile. |
| When using the MultiScreen Solvinert or Solvinert Deep Well plate for Total Drug Analysis, how fast should I shake the plate after adding the serum/plasma and acetonitrile to each well? At what setting should my plate shaker be set? | It is recommended to shake the plate as fast as possible without spilling the solution from the wells. With the clear wells of the Solvinert Deep Well plate it is easy to see the level of the solution in the wells as it shakes. Simply turn the dial of the plate shaker up until the solution is approaching the top of the wells. It has been our experience that plate shakers can have different gauge settings, and even the same setting on different plates can have different actual rates. |
関連製品＆アプリケーション
製品ファミリー
遠心式およびクロマトグラフィーアクセサリーCombine the cost savings of bulk media with the convenience of 96-well filtration plates.詳細はこちら >> |
マルチスクリーン（MultiScreen) HTSバキュームマニホールドFor vacuum filtration of 96 and 384 samples詳細はこちら >> |
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| Sample Preparation |
| Dialysis and Filtration |
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| MultiScreen™ |
カテゴリー
| Life Science Research > Cell Culture and Systems > Cell Culture Flasks, Plates, & Slides > Multiwell Plates |
薬剤投与後のさまざまな時点で、血漿または血清中の薬剤濃度を測定することは、薬剤の薬物動態（PK）を予測するために必要です。そしてPKは、吸収、分布、代謝、排泄（ADME）の評価において重要な要素となります。ADME特性に関する正確な知識を得ることで、毒性の現れるリスクを負うことなく、治療薬レベルを維持できる適切な薬剤投与量を正確に決定することが可能になります。
マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート（MultiScreen Deep Well Solvinert ）フィルタープレート及びマルチスクリーン ソルビナート（MultiScreen Solvinert）フィルタープレートは、血清または血漿中のタンパク質の沈殿をプレート内で行うことができ、薬剤総分析に最適な製品です。本プレートは、迅速、慎重かつ完全なろ液の移送が可能な自動化対応プラットフォームで、薬剤総分析前のサンプル調製に適しています。ソルビナート フィルタープレートファミリーをご利用頂くことで、HPLC-MSまたはHPLC-UVに適用可能な除タンパクサンプルが得られます。
マルチスクリーン ディープウェル フィルタープレート及びマルチスクリーン ソルビナート フィルタープレートは、再現性の高い結果を実現する、堅牢かつ信頼性の高いプラットフォームです。これらのプレートでタンパク質の沈殿・ろ過を行って血清から分離されたサンプルは、基本的にタンパク質フリーで、高い化合物回収率を示し、抽出物による干渉もありません。
自動化対応マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート フィルタープレートは、薬剤総分析において再現性のある結果を提供します。
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ワルファリンをウシ血清にスパイクした後、マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート フィルタープレートでタンパク質の沈殿及びろ過を行いました。アッセイを手動及び完全自動化で行ない、ろ液中の薬剤濃度をLC-MS/MSで分析し、比較しました。自動化法及び手動法による分析結果には線形性が見られ(R2 値= .999)、血清中の薬剤サンプルがマルチスクリーン ディープウェル ソルビナート フィルタープレート内での沈殿及びろ過による手動法または自動化法で確実に調整できることがわかります。高い線形性が示すように、この手順で得られたろ液は、さまざまな濃度範囲にわたって正確なLC-MS/MS分析が可能です。
高性能なプレートデザイン
自動化対応マルチスクリーン ソルビナート フィルタープレートは、96ウェル ディープウェル(2 mL)及びスタンダード(500 µL)の2種類のフォーマットを用意しています。一体型のプレートデザインにより、プレート側面が曲がらず、ロボットアームでの操作も考慮され、バーコードラベルを貼るスペースも備えています。
マルチスクリーン ソルビナート プレートの材質は全て、幅広い化学適合性に優れ、インキュベーション時の液漏れ防止に考慮された設計となっています。
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創薬及びHPLCのサンプル調製に最適
マルチスクリーン ソルビナート フィルタープレート（ディープウェルタイプ及びスタンダードタイプ両方とも）は、創薬分野でのアプリケーションに最適です。例えば、薬剤総分析、固相ライブラリーからのNCEクリーベージ、HPLCまたはLC/MS/MSの前処理などにご使用頂けます。プレートとメンブレンは、低吸着、低溶出、高回収という特長を備えています。クロマトグラフィーの分離には、マルチスクリーンのカラムローダーを用いることで、96個のミニカラムを作ることも可能です。
疎水性メンブレン及びプレフィルター装着のマルチスクリーン ディープウェルもタンパク質沈殿による血漿中の薬剤総分析に適しています。
親水性及び疎水性のPTFEメンブレンを採用
マルチスクリーン ソルビナート フィルタープレートは、化学適合性のある親水性、疎水性のメンブレンを装着しているため、水溶性のみならず非水溶性のサンプルにおいてもろ過を行なうことができます。マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート フィルタープレートには、粒子の多いサンプル用にプレフィルターを装着したものもございます。どちらのメンブレンも高捕捉率のメンブレンです（＞99 ％BSAの酸による沈殿除去が可能です）。
広範囲の溶媒用としては、疎水性PTFEをお勧めします。疎水性PTFEは、NCEのクリーベージや除粒子の目的においてもインキュベーション時間、低溶出といった点で優れています。また本プレートは、固相またはビーズからのインプレートcompound cleavage後のインプレートでのタンパク質沈殿及びサンプル回収にも適しています。さらに、ペプチド合成の除粒子等の目的にもご利用頂けます。
親水性PTFEは、化合物やタンパク質の非特異的吸着を抑え、水溶液、溶媒を用いた多検体ろ過の点で優れています。サンプルの高回収と低溶出という特長により、HPLCやLC/MS/MSの分析に最適です。メンブレンは天然物からのスクリーニング、水溶液中での溶解性試験、薬剤総分析などのアプリケーションにも適しています。
性能
溶媒ベースの調製で薬剤の高い回収率を実現
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アセトニトリルで血漿中のタンパク質を沈殿させて、7種類の薬剤の回収率を調べました。血漿サンプル(5 mL)を薬剤（100 µMストック及びトリチウム標識）でスパイクし、最終薬剤濃度を5 μMにした後、1時間のインキュベーションを行ないました。アセトニトリル(15 mL)を溶液に添加し、しっかりと混合して、タンパク質を沈殿させます。各薬剤につき上澄み液のアリコート(300 μL)を1プレート当たり8ウェルに加えます。その後、溶液を吸引し(12“ Hg)、ろ液を回収します。沈殿溶液のアリコートとろ液のアリコート(100 μL)を比較して、回収率を決定します（cpmろ液/cpm沈殿溶液）。その結果、親水性及び疎水性のマルチスクリーン ソルビナート プレートは共に、90 ％を超える優れた薬剤回収率を実現することがわかりました（サンプルは、CACNを添加後、混合して、予め沈殿させました）。マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート フィルタープレートでも同等の結果が得られました。
注：保管用のフタはフィルタープレートと同様の耐溶剤性を備えていないため、溶剤蒸気に曝露されると破損する可能性があります。
*ジオキサン、ヘキサン、ベンゼンは、ディープウェルプレートでのご使用をお控え下さい。
本チャートのデータは、ミリポアが、メーカーの適合性に関する推奨事項を参考に、特定の化学物質を使用して実施した試験を集積したものです。これらのデータは、特に記載がない限り、ろ過デバイスが化学物質に、25 °C (77 °F)で、48時間曝露された際に予測される結果を示しています。
| 液漏れなしの長時間のインキュベーション | ||
| 溶液 | 24時間インキュベーションをした際の性能 | |
| 親水性PTFEメンブレン | 疎水性 | |
| Milli-Q 18 M水 | R | R |
| EtOH, 100% | R | R |
| MeOH, 100% | R | R |
| MeCl2 | NR | R |
| DMSO/PBS (5%/95% v/v) | R | R |
| ACN, 100% | R | R |
| ACN/H2O (75%/25% v/v) | R | R |
| TFA/ACN (80%/20% v/v) | NR | R |
| DMSO, 100% | R | R |
| DMF, 100% | R | R |
| NaOH, 1.75N | R | R |
| R=Yes NR=推奨しません。24時間試験を実施した場合、ウェルが部分的または完全に液漏れします。インキュベーション時間を短縮すれば対応可能であるかもしれません。 |
||
表2．マルチスクリーン ソルビナート フィルタープレートは、長時間のインキュベーションに対応するよう設計されています。この溶媒適合性表は、200 µLの液体を室温で24時間インキュベーションして報告された結果です。
| フィルタープレート | マルチスクリーン ディープウェル ソルビナート | マルチスクリーン ソルビナート |
| サンプル容量／ Well | ||
| 推奨容量、ｍL | 50 µL - 1.8 mL | 50 µL - 0.45 mL |
| 最大容量、mL | 1.9 mL | 0.5 mL |
| ろ過パラメータ | ||
| 最大遠心力 | 最大 3,000 x g | 最大 3,000 x g |
| 最大吸引力、 mm Hg (in. Hg) | 610 (24) | 610 (24) |
| 材質 | ||
| ベースプレート | ポリオレフィン コポリマー | ポリオレフィン コポリマー |
| メンブレン | 親水性PTFE | 親水性PTFE |
| または | 疎水性PTFE | 疎水性PTFE |
| プレフィルター | ポリプロピレン (オプション) | 該当なし |
| 寸法 | ||
| 膜面積、cm2 | 0.28 cm² | 0.28 cm² |
| プレート縦、 mm | 128 mm | 128 mm |
| プレート横、mm | 85.5 mm | 85.5 mm |
| プレート高さ、mm | 40.7 mm | 14.6 mm |