TAT-CREリコンビナーゼ

TAT-CREリコンビナーゼタンパク質の各ロットに対し、以下のパラメータについて厳密な品質管理試験を行います：

• 純度：SDS-PAGEゲル上でタンパク質純度70%超の41 kDa付近の単一バンド
• 機能的活性：HEK293T-Creレポーター細胞株におけるLoxPで修飾された対立遺伝子の組換えを媒介
• エンドトキシン濃度：タンパク質1 µgあたり1 EU未満

EMDミリポア社は、哺乳動物細胞に直接送達でき、高い組換え効率（マウス細胞で75～100%、ヒト細胞で約60%）をもたらす細胞透過性TAT-CREリコンビナーゼ融合タンパク質を開発しました。 TAT-CREは哺乳動物細胞に容易に移行し、きわめて効率的な組換えを触媒することが可能です。 Creばく露の用量とタイミングは正確に制御できるため、Cre活性を慎重に漸増することが可能です。

Creリコンビナーゼは、バクテリオファージP1由来の酵素であり、loxP部位と呼ばれる2つのDNA認識部位間の部位特異的組換えを触媒します。 LoxP認識部位は、8 bpのスペーサー領域に隣接する2個の13 bpの逆方向反復配列からなっています。 Cre遺伝子とloxP部位はほとんどの種のゲノムには存在しないため、LoxP部位を遺伝子操作して標的細胞に導入することが可能であり、これによりin vitro（培養細胞）とin vivo（動物モデル）で遺伝子の発現を正確に制御する手段として利用できます。

• LoxP部位が異なる染色体上に位置する場合、Creリコンビナーゼは染色体転座を仲介します。
• LoxP部位が反対方向に向いている場合、CreリコンビナーゼはloxP導入部分の反転を仲介します。
• LoxP部位が同じ方向に向いている場合、CreリコンビナーゼはloxP導入部分の欠失を仲介します。

このように、LoxP部位を配置することによって、遺伝子を活性化、抑制、あるいは他の遺伝子と交換することが可能になります。

EMD Millipore社のTAT-CREリコンビナーゼは、大腸菌から効率的にタンパク質を精製するための、HIV-TAT（TAT）由来の塩基性タンパク質移行ペプチド、核移行配列（NLS）、Creタンパク質、N末端ヒスチジンタグ（H6）で構成されるリコンビナント細胞透過性融合タンパク質です。

EMD Millipore社のTAT-CREリコンビナーゼは、ヒトおよびマウスの両方のIPS細胞からSTEMCCAウイルス導入遺伝子を効果的に除去することが示されています。

HEK293T loxpレポーター細胞株アッセイにおいて50% GFP発現を誘導するために必要な、組織培養培地1.0 mL中のTAT-CRE（ug）の標準量は100単位と定義されています。

リコンビナントタンパク質は、50%グリセロール（v/v）、500 mM塩化ナトリウムと20 mM HEPESを含むバッファー溶液（pH 7.4）で提供されます。

-20℃または-80℃で受領日から3か月間安定です。 初回溶解時に、バイアルを遠心して、溶液を穏やかに混合してください。 少量のワーキング容量に分注してから、-20℃または-80℃で冷凍してください。 使用前に、TAT-CREを培地で適切な濃度に希釈し、0.2 μmの低タンパク質結合シリンジフィルター（Milliporeカタログ番号：SLGV 033RSまたはSLGV013 SL）でろ過してください。