フィブリンIn Vitro血管新生アッセイ

緒言

血管新生は、新しい毛細血管を作り出すプロセスです。 多数の正常な（生殖および創傷治癒）および病的な（糖尿病性網膜症、関節リウマチ、腫瘍増殖と転移）プロセスの重要な要素です1。

CHEMICONフィブリンゲルIn Vitro血管新生アッセイキットは、96-ウェルまたはその他の形式で内皮細胞による血管形成を評価するための便利なシステムです。 フィブリンゲル上またはフィブリンゲル内で培養すると、内皮細胞はすみやかに整列し、開存性管腔を示す相互接続ネットワークを形成します2,3。 血管形成は、細胞接着、遊走、分化および増殖を含む多段階過程です4。 フィブリンゲルでの内皮細胞ネットワーク内の細胞間結合と管腔の形成は、VE-カドヘリン、avb3およびa5b1インテグリン、cdc42およびRac1 GTPアーゼ、ならびに膜型マトリックスメタロプロテアーゼ（MT-MMP）の作用に依存します2,3,5,6。 腫瘍細胞由来の血管内皮増殖因子/血管透過性因子は、腫瘍血管からのフィブリノゲンの漏出を促進し、フィブリンに富む血管新生促進性暫定的マトリックスの形成を促進するため、in vitroでのフィブリンゲル内の血管新生は、創傷治癒および腫瘍血管新生の正確なモデルとみなされています7。

フィブリンゲルの形成は、ヘテロ三量体であるフィブリノゲンがトロンビンによって酵素的に切断されることで開始されます8。 その結果生じた切断されたフィブリン分子は、半透明の規則的な多分子性の配列を形成します。 このキット中のフィブリノゲンおよびトロンビンの濃度と処方は、HUVECによる血管形成を最大化し、これらの血管を容易に可視化できるように最適化されています。

アプリケーション

CHEMICONフィブリンゲルIn Vitro血管新生アッセイキットは、外因性シグナルによる血管形成の誘導または阻害を容易にモニタリングできる血管新生のシンプルなモデルです。 フィブリノゲンとトロンビン溶液を混合することで培養ディッシュにフィブリンゲルが簡単に速やかに形成されます。 血管形成の阻害物質または刺激物質をアッセイするには、フィブリンゲルの上に細胞を加える前に、試験を行うさまざまな濃度の阻害物質または刺激物質を内皮細胞懸濁液にあらかじめ混合してください。 細胞をプレーティングした翌日に2層目のフィブリンケルを追加することは任意ですが、これにより最適な生存および高度なネットワークと内腔形成が促進されます。 このアッセイは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）やウシ毛細血管内皮（BCE）細胞などのさまざまな内皮細胞における血管の集合の程度のモニタリングに使用できます。

研究カテゴリー
細胞構造

未開封のキット素材は、-20°Cまたは-70°Cで使用期限まで保存できます。 フィブリノゲン溶液を解凍した後は、室温で最長2週間保存できます。 解凍したトロンビン溶液は、4ºCで最長1か月保存できます。 解凍した100xポジティブコントロール血管新生サプリメントは、4ºCで最長1年間保存できます。

フィブリノゲン溶液：（Part No. 90244）10 mLボトル1本。

トロンビン溶液：（Part No. 90246）7.5 mLボトル1本。

100x ポジティブコントロール血管新生サプリメント：（Part No. 90247）0.5 mLバイアル1本。（フェノールレッドを含まないEBSS中に、ウシ膵臓由来の1.0 mg/mLのインスリン、0.55 mg/mLのヒトトランスフェリン（大部分が鉄を含まない）および0.5 μg/mLのセレンナトリウムが含まれています）。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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