ChemiScreen 組換えヒト CCK₂ コレシストキニン受容体膜製剤

CCK_{2 をコードする全長ヒト CCKB cDNA}

コレシストキニンは、プレプロコレシストキニンに由来し、消化管組織および中枢神経系に存在する、長さが異なる（5 ～ 58 アミノ酸）一連のペプチドです。 ガストリンは、コレシストキニンと同じ C 末端アミノ酸を 5 個持つ関連ペプチドです。 2 種類の GPCR である CCK₁（CCK_A）と CCK₂（CCK_B）は、CCK および／またはガストリンに結合し、ペプチドの生物学的作用を媒介します。 CCK₂ はCCK とガストリンに同程度の親和性で結合するのに対し、CCK₁ は硫酸化 CCK に選択的に結合します。 CCK₂ にリガンドが結合すると、G_q/11 の活性化により細胞内カルシウムの動員を刺激します。 末梢においては、CCK₂ は胃に存在し、ガストリンの刺激による胃酸分泌を媒介します。 中枢神経系では、CCK₂ は不安、うつ病、統合失調症、オピオイド鎮痛に関係づけられています（Noble et al., 1999）。 Chemicon′の CCK₂ 膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、CCK2 相互作用のアンタゴニストやそのリガンドをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。 この膜製剤は [¹²⁵I]-コレシストキニンオクタペプチド（CCK-8）に対して 0.47 nM の Kd を示します。 0.3 nM の [¹²⁵I]CCK-8で、5 または 10 μg/ウェルの CCK₂ 膜製剤は20倍以上のシグナル/バックグラウンド比を示します。

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合。

GPCR クラス：A

タンパク質標的：CCK2 / CCKb

標的サブファミリー：コレシストキニン

インキュベーション条件
非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、GF/C 96 ウェルフィルタープレートを 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50mM HEPES、pH7.4、0.5% BSA で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。

• 結合緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、10 mM MgCl2、1 mM EDTA、ろ過後、4°C
で保存
• 放射性リガンド：［¹²⁵I］-CCK-8（Perkin Elmer#:NEX-203）

• 洗浄緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、ろ過後、4°Cで保存。

各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、0.3 nM の¹²⁵I 標識 CCK-8 で 20 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

包装緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。
包装方法：膜タンパク質は 1 mL の包装緩衝液で 0.5 mg/mL に調整し、急速凍結して -80°C で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。

さまざまな量の CCK₂ 膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値：

	10 µg/ウェル	5 µg/ウェル
シグナル：バックグラウンド	27.4	27.8
特異的結合（cpm）	25,302	20,111

仕様：
1ユニット = 5 μg
[¹²⁵I] CCK-8 結合の B_max：3.47 pmol/mg タンパク質
[¹²⁵I] CCK-8 結合の K_d： ~0.47 nM

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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