ChemiScreen ヒト NK₁ タキキニン受容体膜製剤

NK1 をコードする全長ヒト TACR1 cDNA

哺乳類におけるタキキニンペプチドファミリーは、サブスタンス P、ニューロキニン A、ニューロキニン B の 3 種類のペプチドから成り、GPCR のタキキニン受容体ファミリーである NK1、NK2、NK3 に結合します（Severini et al., 2002）。 タキキニンは消化器系で顕著な活性を示し、腸の収縮と唾液分泌を刺激します。 これらの作用は NK1 および NK2 によって媒介され、NK1 のアンタゴニストであるアプレピタントは化学治療誘発性催吐の治療に使用されています（Rupniak and Kramer, 1999）。 NK1 タキキニン受容体は脳に発現し、うつ病や侵害受容に関与していると考えられています（Saria, 1999）。 NK1 は動物モデルにおいて侵害受容を促進するように見えるものの、NK1 のアンタゴニストがヒトの疼痛緩和において有効であることが証明されていないことから、この活性の重要性については議論の余地があります（Hill, 2000）。 Chemicon′の NK1 膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、NK1 とサブスタンス P との相互作用に対するアンタゴニストをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。この膜製剤は [125I]-サブスタンス P に対して 0.28 ～ 0.47 nM の Kd を示します。10µ µg/ウェル 2 NK1 膜製剤と 0.25 nM [¹²⁵I]-サブスタンス P で、5 倍以上のシグナル／バックグラウンド比が得られました。

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合。

GPCR クラス：A

タンパク質標的：NK1

標的サブファミリー：タキキニン／ニューロキニン

インキュベーション条件
非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、GF/C 96 ウェルフィルタープレートを 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50mM HEPES、pH7.4、0.5% BSA で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。
結合緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、5 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂、0.2% BSA、ろ過後、4°C で保存。
放射性リガンド：［¹²⁵I］-サブスタンス P（Perkin Elmer#:NEX190）
洗浄緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、500mM NaCl、0.1% BSA、ろ過後、4°Cで保存。.
各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、0.25 nM の¹²⁵I 標識 サブスタンス P で 5 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。
包装方法：膜タンパク質は 1 mL の包装緩衝液で 0.5 mg/mL に調整し、急速凍結して -80°C で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。

さまざまな量の NK1 膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値：

	10 µg/ウェル
シグナル：バックグラウンド	7.17
特異的結合（cpm）	2210

仕様：1 ユニット = 10 µg
Bmax：0.38 pmol/mg
Kd: 0.34 nM

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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