ChemiSCREEN CB₁ 膜製剤

CB₁ は主に脳や神経組織に発現する GPCR で、鎮痛、食欲、認知、記憶、自発運動活性など多くの中枢神経系反応を媒介します。 多くのカンナビノイドリガンドが CB₁ に結合し、cAMP 産生の抑制、イオンチャネルや MAP キナーゼの活性化など、Gi/o を介した下流の反応を活性化します。 CB₁ のリガンドには、大麻の主成分である Delta9-THC のような外因性アゴニストや、アナンダミドのような内因性エイコサノイドアゴニストがあります。 CP55940 や R-(+)-WIN55212 のような多くの合成アゴニストや、SR141716A のような CB₁ に対するアンタゴニストが開発されています（Howlett et al., 2002）。 CB₁ アゴニストは鎮痛および制吐作用において臨床的に有用であり、一方、CB₁ アンタゴニストは肥満における食欲の改善に有望です。 Chemicon′の CB₁ 膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、CB1 のアゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。 この膜製剤は [³H]-SR141716A に対して 7 nM の Kd を示します。 2nM の[³H]-SR141716A の存在下では、CP55940 を非標識競合物質として、5 μg/ウェルおよび 10 μg/ウェルの Cb1膜製剤で、それぞれ₁ 膜製剤で、それぞれ 4 倍および 5 倍のシグナル：バックグラウンド比が得られました。

ヒト CB₁

放射性リガンド結合アッセイ & GTPγS 結合用ヒト CB1 GPCR 膜調整剤。

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合。

GPCR クラス：A

タンパク質標的：CB1

標的サブファミリー：カンナビノイド

インキュベーション条件
アッセイ推奨条件：非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、GF/C 96 ウェルフィルタープレートを 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50 mM HEPES、pH 7.4、0.5% BSA. で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。

結合緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、5 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂、0.2% BSA、ろ過後、4°C で保存。 リガンドは 30% DMSO を含んだ緩衝液で希釈し、最終 DMSO 濃度が 15% になるように膜に添加しました。放射性リガンド：[³H] SR141716A（Amersham #TRK1028)

洗浄緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、500mM NaCl、0.1% BSA、ろ過後、4°Cで保存。.

各バイアルには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、2 nM の[³H] SR141716A で約 4 倍のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無:添加。包装方法：膜タンパク質は 1 mL の包装緩衝液で 0.5 mg/mL に調整し、急速凍結して -80°C で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。

仕様：
1 ユニット = 10 μg
Bmax：15 pmol/mg
K_d： SR141716A に対して 7 nM

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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