グラム染色 (ハッカー変法)
グラム染色には種々手法がありますが、メルクミリポアではハッカー変法用グラム染色液のキット (グラムカラー) および個別包装も取り扱っております。またルゴール液として従来のルゴール溶液だけでなく、安定化剤 PVP (Polyvinylpyrrolidone)入りルゴール溶液 (PVP加)も扱っております。
・ 良好な染色性 ・ 簡単操作 ・ 再現性に優れた染色
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製品名
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カタログ番号
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包装単位
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備考
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グラムカラー グラム染色液セット |
1.11885.0001 |
1パック |
構成;
- クリスタルバイオレット染色液 (製品番号: 109218) (1 x 500mL)
- ルゴール溶液(PVP加) (製品番号: 100567) (1 x 500mL)
- 脱色液 (エタノール/アセトン) (製品番号: 110218) (2 x 500mL)
- サフラニン染色液 (製品番号: 109217) (1 x 500mL)
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染色方法
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時間
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説明
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ステップ1
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前染色 |
約1分 |
火災固定した塗抹面にグラム・クリスタルバイオレット染色液を注ぎ、約1分間染色。 |
ステップ2
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軽く水洗 |
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塗抹面に載った余分なクリスタルバイオレット染色液を洗い流す。 |
ステップ3
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媒染 |
約1分 |
ルゴール溶液(PVP 加)または、ルゴール溶液を塗抹面にのせる。 |
ステップ4
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軽く水洗 |
約5秒 |
塗抹面上の余分なルゴール液を洗い流す。 |
ステップ5
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分別 * |
約10~30秒 |
脱色液 (グラム・アセトンエタノール液)を塗抹面に注ぎ、色素がもう溶け出さない程度に脱色する。 |
ステップ6
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軽く水洗 |
約5秒 |
塗抹上の脱色液を洗い流す。 |
ステップ7
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後染色 ** |
約1分 |
グラム・サフラニン染色液で後染色し、グラム陰性菌を赤色に染色。 |
ステップ8
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軽く水洗 |
約5秒 |
塗抹面上のサフラニン染色液を洗い流す。 |
ステップ9
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乾燥、鏡検 |
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染色結果 |
グラム陰性菌 --> 赤色
グラム陽性菌 --> 紫色
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* : グラム染色では分別を適切にコントロールすることが重要となります。分別しすぎると偽陰性、分別不十分だと偽陽性の原因となります。そこでグラム染色に慣れていない場合は、コントロール (陽性菌と陰性菌)とともに染色されることをお勧めいたします。また分別操作の前の染色操作過程で塗抹を乾燥すると分別過程で色素がグラム陰性菌から脱色されにくく染色ムラの原因となります。また分別液としてメタノールも使用可能です。メタノール使用の場合、分別時間を少し長めにしてください。
** : サフラニン染色液の他に、抗酸菌染色に使用されるチールネンセンカルボールフクシン染色液を精製水で約10倍に希釈したパイフェル液の使用も可能です。サフラニンに比べ、フクシンはグラム陰性菌をより明瞭に染め、鏡検しやすい標本を作製できます。
お問合せ先
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