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フローサイトメトリーアプリケーション -
免疫研究

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免疫研究

新しいポスター
組織特異的な免疫環境

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異物の侵入に対する身体の反応を介在する免疫系は、リンパ球と総称される複数種の細胞から構成されています。リンパ球のサブタイプには、B細胞（抗体を分泌）、細胞傷害性T細胞、ヘルパーT細胞（サイトカインを分泌）、ナチュラルキラー（NK）細胞があります。リンパ球のサブタイプやサイトカインシグナリングの特性解析は、複雑な免疫系を理解するために必要不可欠です。

Guava easyCyteシステムは、最大14種類のパラメータを検出し、汎用的な免疫アッセイを迅速に実施できます。Amnisイメージングフローサイトメーターは5～12種類のパラメータによって、細胞懸濁液中の特定細胞やレアイベントの視覚的検証などを含む、より複雑な解析を容易に実施できます。

フローサイトメトリーによるマルチパラメータ表現型解析により、インタクトな細胞における免疫シグナリングの動態研究が可能となることに加え、次のような多くのユニークな機能が利用可能です：

  • 不均一な混合液において1種類のサブポピュレーションを識別します
  • 抗原による活性化の影響を評価します
  • 正常な免疫活性化の抑制や、病状に起因する表現型に対する影響を検出します。
3種類を識別する能力

免疫研究に対するデュアルプラットフォームアプローチ。 抗体解析による3種類の識別（リンパ球：赤色、CD3、単球：黄色、CD14、顆粒球：緑色、CD15）。成人血液をCD3-PE-CY5、CD14-PE、CD15-FITCで染色し、Guava® 測定用の溶解液で細胞を溶解し、Guava easyCyteにて測定しました。表示のデータでは、3種類の主な白血球細胞集団が明確に識別されています。

免疫研究に対するデュアルプラットフォームアプローチ：
Guava easyCyte装置を用いたデータは、MAGPIX®システムで用いるMILLIPLEX MAP™サイトカインパネルに相補的です。


免疫研究に関する記事を掲載しているニュースレターは、こちらからダウンロードしてください。
Auto CD4/CD4%アッセイを用いたCD4数およびCD4%値の正確性。
疾患成人由来サンプル（上図）と疾患小児由来サンプル（下図）に関する、Guava® Auto CD4/CD4%試験によるCD4%データと、比較対象の装置によるデータの回帰プロット。

AutoCD4/CD4%（ヒトCD4 T細胞の計数＆割合）

Guava® Auto CD4/CD4%は、全血サンプル中のCD4+ヒトT細胞計数用アプリケーションです。このアプリケーションは専用の装置プラットフォームで利用可能です。全血中のCD4+ Tリンパ球数、総リンパ球数に占める割合としてのCD4+細胞数の測定値が得られます。

AutoCD4に関するデータシートは、こちらからダウンロードしてください。

複数の化合物について、CD4およびCD8サブセット中のアネキシンVへの応答に基づき評価したアポトーシスレベルをヒートマップに表しています。
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免疫毒性学

T細胞介在性細胞傷害は、免疫応答の下方制御において重要な役割を担っています。さらに、免疫抑制化合物は、免疫毒性を通してその効果を介在することがよくあります。メルクは、多種多様なメカニズムを通じた免疫毒性評価キットを豊富に取り揃えています。

右図の例では、PBMCが80種類の毒性化合物で20時間処理されました。細胞をFlowCellect™ヒトT細胞アポトーシスキットとCD4 T細胞FASアッセイキットで処理後、Guava easyCyteで解析しました。複数の化合物について、CD4およびCD8サブセット中のアネキシンVへの応答に基づき評価したアポトーシスレベルをヒートマップに表しています。この表は、著しくアポトーシスを示した化合物とアポトーシスを起こしたCD4およびCD8 T細胞の割合（%）をまとめたものです。

免疫毒性のポスターは、こちらからダウンロードしてください。

ヒトB細胞機能

メモリーB細胞は、健常者のB細胞のおよそ30～60%を占めています。B細胞のサブポピュレーションは、免疫不全疾患の患者において不完全であることが報告されており、これは循環CD19+ CD27+メモリーB細胞数の減少とも関連しています。ヒトB細胞の評価のために、メルクは様々なオプションをご用意しています。

特異的な表現型のCDマーカーを用いたヒトメモリーB細胞の同定

ヒトPBMCからのヒトメモリーB細胞の分離と特定。

ヒトPBMCからのヒトメモリーB細胞の分離と特定。ヒトメモリーB細胞は、ヒトCD5、CD19、CD27という特異的ヒトCDマーカーを使用して表現型から同定できます。CD27は、メモリーB細胞特定の主要なマーカーであることが認められています。（A）では、リンパ球集団がゲーティングされており、健常者由来サンプルのB細胞を、CD5+ CD19+（i）をプロットする二変量解析によって示しています。正常な患者のメモリーB細胞のサブセットも、CD19+ CD27+（ii）を用いて特定されます。健常者では、メモリーB細胞がB細胞のおよそ30～60%を占めています。B細胞のサブポピュレーションは免疫不全疾患の患者において不完全であり、循環CD19+ CD27+ メモリーB細胞数が減少しています。

ヒトB細胞機能に関するポスターは、こちらからダウンロードしてください。

このヒストグラムは、細胞のタイプによらず、細胞表面Gタンパク質共役型受容体タンパク質の定量にメルクのFlowCellect™ GPCR Surface Indentificationキットが使用可能であることを示しています。
このヒストグラムは、細胞のタイプによらず、細胞表面Gタンパク質共役型受容体タンパク質の定量にメルクのFlowCellect™ GPCR Surface Indentificationキットが使用可能であることを示しています。右端（ピンク色）のヒストグラムは、陽性コントロール細胞、中央（緑色）はネイティブ細胞株（Jurkat T細胞）、左端（赤色）は陰性コントロール細胞を示しています。

ケモカイン受容体発現の定量化

GPCR Surface Indentificationフローサイトメトリーキットは、ケモカイン受容体の定量にあたり、従来の手法よりもはるかに短い時間で高品質の再現性の高いデータを提供する上、放射性リガンド結合アッセイの汚染リスクや高コストとも無縁です。フローサイトメトリー用に検証済みのGPCR特異的抗体と、キットに含まれている陽性および陰性コントロール細胞を用い、あらゆる細胞表面のGPCRを特定・定量できるようになりました。メルクは、ケモカイン受容体の表面発現の定量にFlowCellect™キットを提供しています。

ケモカイン受容体発現の定量に関するポスターは、こちらからダウンロードしてください。