Kit Montage® Antibody Purification
Designed for fast and easy antibody purification from serum, ascites or cell culture supernatants.
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Panoramica
Specifiche tecniche
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Documentation
Riferimenti bibliografici
| Panoramica dei riferimenti bibliografici |
|---|
| Antibody Purification with Affinity Spin Columns Kavonian, Mark,BioScience Technology, July 2003 BioScience Technology, July 2003 2003 |
| Considerations During Development of a Protein A-Based Antibody Purification Process Iyer et al.,Biopharm, January 2002, pp 14-20 Biopharm, January 2002, pp 14-20 2002 |
| A sensitive enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA) for the detection of staphylococcal prtein A (SpA) present as a trace contaminant of murine immunoglobulins purified on immobilized protein A Miguel A.J. Godfrey, Piotr Kwasowski, Roland Clift and Vincent Marks Journal of Immunological Methods, 149(1992) 21-27, 1992 1992 |
FAQ
| Domanda | Risposta |
|---|---|
| What is the shelf life of the Prosep A and Prosep G spin columns? | The spin columns/media are under warranty for 2 years provided they are stored at 2-8 C. |
| Do I need to filter the buffers provided with the Montage Antibody Purification kit? | The buffers supplied with the kit are pre-filtered for immediate use. |
| Do I need to pre-filter my sample before loading it onto a Prosep A or ProSep G spin column? | All samples must be filtered through a 0.22 mm filter immediately before loading the sample onto the column. We recommend using a Steriflip-GP 0.22 mm filter. |
| What is the binding capacity of the Prosep A spin column? | Using the Prosep A spin columns we have been able to bind >20 mg of Rabbit IgG. |
| What is the maximum volume I can load onto the Prosep A and Prosep G spin columns? | You can load up to 20 ml in a Prosep A or Prosep G sping column for a swinging bucket rotor and up to 10 ml for a fixed angle rotor. We recommend that you spin it in a swinging bucket rotor. |
| Why do you suggest that the Prosep A spin columns be spun at 100-150 xg for 20 minutes? | The low speed, twenty minute centrifugation maximizes IgG / resin contact which increases IgG binding efficiency. |
| Can I use a fixed angle rotor or a swinging bucket rotor with the Prosep A and Prosep G spin columns? | Swing bucket rotors are recommended because they provide uniform flow through the resin. For optimal performance with a fixed angle rotor, ensure that the orientation of the Prosep A spin coulmn is the same for all steps. Also please note that the maximum sample loading volume for a fixed angle rotor is ten ml versus twenty ml with a swinging bucket rotor. |
| What is the minimum elution volume for the Prosep A and Prosep G spin columns? | We suggest 10 ml. Smaller volumes can be used but they may result in incomplete IgG recovery. If you use a smaller volume the neutralization buffer volume should also be adjusted accordingly. |
| How do I regenerate the Prosep A spin columns? | We recommend that you wash the plugs with 10 ml of Elution Buffer B2 by centrifuging at 500 xg got 5 minutes. re-equilibrate the media with 5 ml of Binding Buffer A by centrifuging the spin column at 500 xg for 2 minutes. Proceed to step 1 of the antibody purification protocol for immediate re-use or store the plugs without their end caps in 5 ml of Binding Buffer a in a 15 ml screw-capped tube for future use. |
| Can I autoclave the Prosep A and Prosep G spin columns? | The Prosep A and Prosep G spin columns cannot be autoclaved. |
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Categorie
I kit Montage Antibody Purification sono stati ideati per purificare con semplicità gli anticorpi da siero, liquido ascitico o surnatante di cellule in coltura. Essi comprendono colonnine da centrifuga pre-impaccate con resine PROSEP-A o G ad elevata capacità. Con questi kit non non ci sono pompe da preparare e colonne da impaccare. Tutto quello che serve per purificare 10–20 mg di anticorpi in meno di 60 minuti è una centrifuga.
Il protocollo è semplice da seguire e, a differenza dei tradizionali metodi basati sul flusso per gravità, la tecnica della purificazione in centrifuga non richiede la presenza costante dell'operatore.
I risultati sperimentali mostrano che le colonnine possono essere rigenerate fino a 10 volte senza alcuna perdita della capacità di adsorbimento o riduzione di specificità.
Prestazioni
Impiego ripetuto delle colonnine da centrifuga
)
Si è condotta per 10 volte la purificazione di IgG umane da siero normale utilizzando una colonnina da centrifuga PROSEP-G rigenerata.
Purificazione di anticorpi monoclonali
)
Purificazione delle IgG monoclonali di topo da liquido ascitico su colonnina da centrifuga PROSEP-A. Corsia 1: liquido ascitico non purificato. Corsia 2: flow-through del liquido ascitico. Corsia 3: lavaggio dal flow-through. Corsia 4: 5 µg di anticorpi purificati. Per gentile concessione di Exalpha Biologicals.
| Affinità di Proteina A e Proteina G | ||||||
| Proteina | A | G | Proteina | A | G | |
| IgG1 umane | ++ | ++ | IgM di ratto | + /-- | - | |
| IgG2 umane | ++ | ++ | IgG di coniglio | ++ | ++ | |
| IgG3 umane | -- | ++ | IgG di criceto | + | ++ | |
| IgG4 umane | ++ | ++ | IgG di porcellino d'India | ++ | + | |
| IgA umane | + | -- | IgG bovine | + | + | |
| IgD umane | + | -- | IgG di pecora | + / -- | + | |
| IgE umane | + | -- | IgG di capra | + /-- | + | |
| IgM umane | + | -- | IgG di maiale | ++ | ++ | |
| IgG1 di topo | + | + | IgG di pollo | -- | + /-- | |
| IgG2a di topo | ++ | ++ | Frammenti | |||
| IgG2b di topo | ++ | ++ | Fab umane | + | + | |
| IgG3 di topo | + | ++ | F(ab')2 umane | + | + /-- | |
| IgM di topo | + /-- | -- | ScFv umane | + | -- | |
| IgG di ratto | ++ | ++ | Fc umano | + | -- | |
| IgG1 di ratto | + /-- | + | Catene K umane | -- | -- | |
| IgG2a di ratto | + /-- | ++ | Catene umane | -- | + | |
| IgG2b di ratto | + /-- | + | ||||
| IgG2c di ratto | + /-- | + | ||||
| Legenda: ++ = grande affinità; + = affinità moderata/scarsa; +/-- = sono necessari ulteriori studi ; -- = nessuna affinità | ||||||
| Contenuto dei kit | Colonnine da centrifuga, tamponi e dispositivi necessari per la preparazione e la concentrazione dei campioni | |
| Materiale di supporto della resina | Vetro poroso | |
| Dimensioni delle particelle di resina, µm | 75 µm–125 µm | |
| Volume del letto, µL | 1.6 mL | |
| Capacità di legame | ||
| Proteina A | >20 mg di IgG di coniglio | |
| Proteina G | >10 mg di IgG di coniglio | |
| Limiti di pH | pH2 – pH9 | |
| Volume massimo, mL | 20 mL (maximum in swinging bucket rotor) | |
| Temperatura di conservazione | ||
| Codice-colore dei tappi | ||
| Proteina A | Rosso | |
| Proteina G | Giallo | |