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Kits de señalización celular y MAPmates™
Elija los kits preparados para poder explorar las vías o los procesos enteros. O diseñe sus propios kits eligiendo single plex MAPmates™ según las directrices proporcionadas.
No deben combinarse los siguientes MAPmates™: -MAPmates™ que requieren un tampón de ensayo diferente. -Pares MAPmate™ fosfoespecíficos y totales, por ejemplo, GSK3β y GSK3β (Ser 9). -MAPmates™ con panTyr y específicos de sitio; por ejemplo, receptor del fosfo-EGF y fosfo-STAT1 (Tyr701). -Más de 1 fosfo-MAPmate™ para una sola diana (Akt, STAT3). -La GAPDH y la β-tubulina no pueden combinarse con kits o MAPmates™ que contengan panTyr.
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96-Well Plate
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48-602MAG
Buffer Detection Kit for Magnetic Beads
1 Kit
Opción para ahorrar espacio Los clientes que adquieran múltiples kits pueden optar por ahorrar espacio de almacenamiento retirando el embalaje del kit y recibiendo los componentes de sus ensayos multiplex en bolsas de plástico para un almacenamiento más compacto.
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Membranas de transferencia Immobilon, sándwiches y papel de filtro para transferencia
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications.Más
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications. Menos
Mobile Phase Preparation for UHPLC: Membrane Filtration Method Affects System Performance and Leaching of Extractable Impurities Subodh Kulkarn(1), Jesmi George(2) and Vivek Joshi(2) (1) Millipore India Pvt. Ltd., Bioscience Division, 50A, 2nd Phase, Ring Road, Peenya, Bangalore, India 560058 (2) Millipore Corp., Bioscience Division, 17 Cherry Hill Drive, Danvers, MA 01923 LCGC
2009
UHPLC/UPLC® is a revolutionary chromatography technique that is gaining wide acceptance among researchers due to improved resolution, shorter chromatographic runs, and the capability for doing fast method development. The presence of sub-2 µm particles in UHPLC columns provide these benefits but also poses challenges in sample and mobile phase preparation. Particulate impurities in the sample or mobile phase can cause backpressure buildup in the UHPLC system, causing system failure. In fact, most UHPLC instrument vendors recommend filtration of mobile phase using 0.2 µm filters, but there is a lack of data showing the benefits of filtration. In this article we describe the filtration of mobile phases through syringe filters of varying pore size and membrane type, followed by analysis by UHPLC and mass spectrometry. Our results clearly indicate that filtration of mobile phase components using the optimal membrane filter will help protect UHPLC systems from particulate impurities that may clog and shut down the system, increase the sensitivity of detection, and improve the accuracy of quantitation.
Quantitation of Protein on gels and blots by infrared fluorescence of Coomassie blue and fast green Luo S., Wehr N.B., Levine R.L. Analytical Biochemistry:350 (2006):233-238
2005
Immunoblotting (Western)
Role of the Small Heat Shock Proteins in Regulating Vascular Smooth Muscle Tone McLemore E.C., Tessier D.J., Thresher J., Komalavilas P., Brophy C.M J. Am. Coll. Surg. 2005, Vol 201 (1):30-36
2004
Pre-B-cell colony-enhancing factor is a secreted cytokine-like protein from the human amniotic epithelium. Ognjanovic S, Ku TL, Bryant-Greenwood GD. Am J Obstet Gynecol. 2005 Jul;193(1):273-82
2004
Western Blotting
A high-affinity reversible protein stain for Western blots Antharavally B.S., Carter, B., Bell, P.A., Mallia K. Analytical Biochemistry 2004,Vol 329:276-280
2004
Biochemical analysis of GABA receptor subunits alpha 1, alpha 5, beta1 beta2 in the hippocampus of patients with Alzheimer's disease neurophathology Rissman, R.A., Mishizen-Eberz A.J. N.,Wolfe, C.B.B., DeBlas A.L., Miralles C.P., Ikonomovic M.D., armstrong D.M. Neuroscience 120 (2003) 295-705
2003
Western Blotting
Proteomics reveals protein profile changes in doxorubicin treated MCF7 human breast cancer cells Cheng S.T., Pan T, L., Tsai Y.Ch, Huang C. M. Cancer letters 2002. vol 181:95-107
2002
Towards proteome-wide production of monoclonal antibody by phage display. Bin Liu, Lan Huang, Carina Sihlbom, Al Burlingame and James D. Marks. J Mol Biol. 2002 Feb 1;315(5):1063-73
2002
Mass Spectrometry Sample Prep
Characterization of retinoic acid receptor-deficient keratinocytes. Goyette Philippe; Chen Chang Feng; Wang Wei; Seguin Francois; Lohnes David(a) Journal of Biological Chemistry v 275 pg 16497-16505 June 2, 2000
1999
Protection of renal inner medullary epithelial cells from apoptosis by hypertonic stress-induced p53 activation Dmitrieva Natalia(a); Kultz Dietmar; Michea Luis; Ferraris Joan; Burg Maurice ; Journal of Biological Chemistry v 275, pg 18243-18247 June 16, 2000 Journal of Biological Chemistry v 275, pg 18243-18247 June 16, 2000
1999
Should I prewet MultiScreen Immobilon-P plates before use?
Yes. Use 15 ul of 70% ethanol or methanol to prewet the Immobilon P membrane. This membrane is hydrophobic and requires a prewet to allow liquid to pass through the membrane.
What is the protein binding capacity of Immobilon-P?
The protein (BSA) binding capacity for the Immobilon P membrane is 131 micrograms per sq. cm. of membrane.
What is the thickness of the Immobilon PSQ?
Immobilon PSQ is 200 microns thick.
Can ethanol be substituted for methanol in the Western Blot procedure?
Yes, it is acceptable to replace the methanol with ethanol as long as you substitue it 1 for 1. So 20% methanol would be replaced with 20% ethanol.
What is the smallest size of a protein or peptide which binds to the Immobilon-PSQ?
For the PSQ we do not suggest that they go lower than 2 kDa for the protein size. To help promote the transfer of the smaller proteins the methanol concentration of the transfer buffer can be increased to 20% (w/v) and the SDS lowered to 0.01%. The strength of the electric field can also be reduce by 50% to increase the proteins contact time with the membrane. Standard stains can be used such as Coomasie Blue and Ponceau. Keep in mind that some of the stain such as Coomasie Blue are not reversible.
How many times can I strip and reprobe Immobilon-P?
While 2-3 times is probably the limit, it is difficult to give an absolute number in regards to stripping and reprobing. This is because there are many factors to consider when it comes to protein binding to PVDF and primary antibody affinity to these proteins. Different proteins will have varying degrees of affinity to PVDF. This is based on factors discussed in our Protein Blotting Handbook (see TP001; Protein Binding section). One round of stripping may remove one protein and leave another intact. The same could occur when using different primary antibodies. Different antibodies will have varying affinities to different proteins. If carrying out several rounds of stripping and reprobing, one strategy might be to detect the least abundant proteins earlier leaving the higher abundant proteins later for detection.
What is the difference between Immobilon–FL and Immobilon-P?
Both membranes are made from PVDF. The difference in background fluorescence is due to proprietary modifications in the membrane manufacturing process.
How does the protein binding capacity and protein retention of Immobilon-FL compare to Immobilon-P?
Immobilon-FL’s protein binding capacity and protein retention are comparable to Immobilon-P.
Is Immobilon-FL better than Nitrocellulose membrane for Fluorescence detection?
Yes. Background fluorescence of Immobilon-FL is typically 2-5X lower than that of nitrocellulose, thus improving signal-to-noise ratio (sensitivity). Nitrocellulose membranes have other disadvantages. If allowed to dry out, they become brittle, tend to fracture and are difficult to handle. They are not recommended for stripping and re-probing. Nitrocellulose blots need to be scanned as soon as possible after detection, as diffusion of signal on a wet membrane may also occur.
What fluorescence-based detection methods can be used with Immobilon-FL?
Immobilon-FL can be used in Western blotting applications using either fluorescent dye-conjugated antibodies or chemi-fluorescence substrates. Western blots can be imaged in the visible or IR range. Single color detection or multiplexing for co-localization studies can be performed efficiently on Immobilon-FL Fluorescent proteins, e.g. green fluorescent protein, (GFP) or proteins tagged with GFP, blotted onto the membrane can be readily detected as well.
Millipore ofrece tres membranas Immobilon diferentes, cada una de ellas optimizada para diferentes aplicaciones de transferencia de proteínas. Ahora también ofrecemos sándwiches de transferencia con hojas de membrana precortadas y papel de filtro de transferencia.
Las membranas Immobilon ofrecen diversas ventajas en comparación con la nitrocelulosa. No se agrietan ni se curvan, y pueden cortarse sin romperse. También ofrecen un bajo ruido de fondo, amplia compatibilidad química y capacidades superiores de tinción. Además, pueden rehibridarse múltiples veces.
Membrana Immobilon-P
Tamaño de poro de 0,45 µm
Recomendada para la mayoría de las transferencias "Western", especialmente proteínas >20 kDa
El protocolo de inmunodetección rápida de Millipore reduce el tiempo de detección en hasta 2 horas al eliminar el bloqueo de la membrana y varios pasos de lavado sin perder sensibilidad o especificidad
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Membrana Immobilon-PSQ
Tamaño de poro de 0,2 µm y estructura interna grande
Adsorción proteica más alta y rendimientos de secuenciación más altos que otras
membranas
Recomendada para transferencias de proteínas <20 kDa
Impide el "blow-through" de proteínas de bajo peso molecular
Membrana Immobilon-FL
La primera membrana de transferencia optimizada para aplicaciones de fluorescencia
El ruido de fondo extremadamente bajo mejora la sensibilidad de todos los protocolos de detección de fluorescencia
Compatible con todas las sondas fluorescentes que se usan normalmente a todas las longitudes de onda de emisión y excitación
Ideal para aplicaciones "multiplex" y quimiofluorescencia
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Sándwiches de transferencia
Cuando necesite procesar varias transferencias, los sándwiches de transferencia son una opción conveniente que ahorra tiempo. Nuestros sándwiches incluyen hojas de membrana Immobilon-P intercaladas con hojas precortadas de papel de filtro de transferencia de grado cromatográfico.
Papel de filtro de transferencia
Papel de filtro de transferencia de grado cromatográfico precortado para adaptarse a los tamaños más populares de transferencias "Western".
Rendimiento
Protocolo de inmunodetección rápida con membrana Immobilon-P
Paso
Inmunodetección estándar
Inmunodetección rápida
1. Bloquear la membrana
1 h
Ninguno
2. Incubar con anticuerpo primario
1 h
1 h
3. Lavar la membrana
3 x 10 min
3 x 5 min
4. Incubar con anticuerpo secundario
1 h
30 min.
5. Lavar la membrana
3 x 10 min
3 x 5 min
6. Añadir sustrato
5 min.
5 min.
Tiempo total
4 h 5 min
2 h 5 min
La membrana Immobilon-PSQ evita el blow-through
Se transfierieron patrones de peso molecular (líneas 1, 3, 5, 7) y lisado de hígado de ternera (líneas 2, 4, 6, 8) a membranas Immobilon-P o Immobilon-PSQ. Se colocó una hoja de Immobilon-PSQ detrás de las membranas primarias para capturar proteínas que pasan a través (líneas 5 y 6 detrás de Immobilon-P; líneas 7 y 8 detrás de Immobilon-PSQ).
La membrana Immobilon-FL está optimizada para fluorescencia
Detección multiplex actina-tubulina en una membrana Immobilon-FL. La actina de músculo de conejo (rojo) se detectó usando anticuerpo de conejo anti-actina 1oAB y anticuerpo QDot® 655 de cabra anti-conejo 2oAB. La tubulina de cerebro porcino (verde) se detectó usando anticuerpo de ratón anti-tubulina 1oAB y anticuerpo QDot® 565 de cabra anti-ratón 2oAB. Con ambos analitos, se observaron sensibilidades hasta de 7 ng. Datos proporcionados por Quantum Dot Corporation.
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