Kit de préparation de plasmides et de BAC en format 96 puits
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Aperçu
Caractéristiques
Guide d'achat
Documentation
FAQ
| Question | Réponse |
|---|---|
| What is holdup volume of a MultiScreen Plate used with the Montage Kits? | The holdup volume for the MultiScreen plate is between 5-20 microliters. |
| When using the Montage kits how can I tell when filtration in the MultiScreen plate is complete? | Filtration is complete when the individual wells of the MultiScreen plate are empty and the membranes appear shiny. |
| The two sections of the MultiScreen plates used in the Montage kits are separating under vacuum. Why? | The most common reason for this problem is the lack of a MultiScreen underdrain support grid in the vacuum manifold. A MultiScreen support grid is required for proper functioning of the MultiScreen plate with any vacuum manifold. |
| The total yields with the Montage Plasmid Miniprep-96 kit seems to be less then with competitive products. Why? | The Montage kit uses less culture volume (1ml vs. 1.3 ml) than most competitive kits. However the relative yield is equivalent. |
| What is the total processing time for plasmid preparation using the Montage kits? | Processing time depends on viscosity of sample, number of manifolds, familiarity with protocol, temperature. (Also, need vacuum capable of 24 in Hg or 812.7 millibar, 609.6 torr.) |
| Can the culture block in the Montage 96 Plasmid prep be autoclaved? | Yes. |
| What is the 260/280 assessment ratio when using the Montage Plasmid Kit? | The 260/280 reading is 1.8-2.0. This signifies and extremely high level of purity. |
| Can I use this kit in centrifugal mode? | Use of the Montage Plasmid Miniprep-96 Kit in a centrifugal protocol is not recommended. |
| I'm using your two plate plasmid prep protocol and the wells are overflowing when I transfer the cleared lysate to the FB plate. What am I doing wrong? | Overflowing can result from any of the following:
|
| I have observed RNA contamination of my plasmid preps. Why? | Failure to add RNase A to solution 1 will often result in RNA contamination in your DNA miniprep. |
Produits & Applications associés
Produits associés classés par : Application Facete
| Protein Purification |
| Dialysis and Filtration |
Produits associés classés par : Brand Facete
| Montage® |
Catégories
Le kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 est un kit facile à utiliser pour préparer rapidement des minipreps de plasmides ou de chromosome bactérien artificiel (BAC) avec une pureté élevée. Grâce à sa technologie de séparation brevetée, le kit Montage offre un protocole simple qui élimine les longues étapes de fixation/élution et de centrifugation. Il permet ainsi de produire de l'ADN d'une grande pureté et ce, de manière reproductible en moitié moins de temps que les méthodes traditionnelles.
Les échantillons purifiés de PCR conviennent aux applications ultérieures les plus sensibles à savoir le clonage, le séquençage d'ADN, la transformation. Les applications BAC comprennent le séquençage, les empreintes génétiques, les puces à ADN et l'amplification par PCR.
Le kit comprend tous les réactifs et le matériel à usage unique dont vous avez besoin pour purifier de l'ADN plasmidique ou de BAC avec un format à 96 puits. Suite à l'étape de lyse bactérienne, il suffit de trois courtes étapes de filtration pour obtenir 96 échantillons d'ADN d'une grande pureté à partir de chaque plaque.
Le kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 est idéal pour une utilisation sur des plateformes robotisées. La récupération des échantillons purifiés par le haut de la plaque ainsi que l'élimination des longues étapes de centrifugation améliorent la compatibilité du kit avec une large gamme de systèmes automatisés.
- Aucune étape de centrifugation ou de précipitation n'est nécessaire.
- Temps de traitement minimum
- Excellents rendements, très grandes pureté et reproductibilité.
- Automatisables
Composants du kit
| Pièce | Fonction |
| Bloc à 96 puits Deep Well pour culture cellulaire |
Croissance de la bactérie hôte |
| Plaque Plasmid | Purification de l'ADN plasmidique |
| Plaque de clarification du lysat | Clarification du lysat bactérien |
| Plaque de stockage à fond en V | Stockage des échantillons d'ADN plasmidique |
| Film adhésif | Scellage de la plaque de stockage à fond en V |
| RNase A | Additif requis pour la Solution 1 |
| Solution 1 | Remise en suspension des cellules |
| Solution 2 | Lyse cellulaire |
| Solution 3 | Neutralisation |
| Solution 4 | Lavage |
| Solution 5 | Remise en suspension/stockage de l'ADN plasmidique |
| Feuille de scellage | Scelle les plaques pendant la croissance (doit être percée) |
| Pour de plus amples informations concernant les composants du kit, consultez le manuel d'utilisation du kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 ou visitez le site www.millipore.com/montage. | |
Protocole pour la miniprep d'ADN de plasmide
Pour le protocole pour l'ADN de BAC, consultez le guide de l'utilisateur du kit Montage Plasmid MiniprepHTS, P36315
)
| 1. | Après la lyse bactérienne, transférez les lysats de la plaque de culture "Deep Well" dans la plaque de clarification. Clarifiez les lysats par filtration sous vide directement dans la plaque Plasmid. |
| 2. | Installez la plaque Plasmid sur la grille du support de filtration sous vide et appliquez le vide pendant 5 à 7 minutes afin de concentrer l'échantillon. L'ADN plasmidique est retenu à la surface de la membrane alors que les contaminants s'éliminent par filtration. Ajoutez la solution de lavage puis filtrez sous vide pendant 3 à 5 minutes. |
| 3. | Ajoutez le tampon de remise en suspension puis récupérez l'échantillon purifié par pipetage. |
| 4. | Transférez les échantillons dans la plaque à fond en V pour une utilisation immédiate ou leur stockage. |
Performance — ADN plasmidique
Qualité élevée
)
Gel d'agarose montrant la qualité et l'uniformité de l'ADN plasmidique purifié au moyen du kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 (Echelle de poids moléculaire : fragments de phage Lambda digérés par Hind III).
| Rendements élevés* | ||
| Souche hôte | Plasmide | Rendement (µg) |
| XL 1-bleu | pUC19 | 2,1 – 6,1 |
| pLH2** | 3,5 – 9,2 | |
| JM109 | pUC19 | 2,4 – 6,4 |
| pLH2** | 3,5 – 9,1 | |
| *Les résultats varient en fonction de la souche hôte, du plasmide et des conditions expérimentales. **pLH2 est dérivé de pUC19. Le fragment de 2,0 kb issu de la digestion par Hind III du phage l a été cloné dans le site Hind III de pUC19, produisant ainsi un plasmide de 4,7 kb. |
||
| Résultats fiables | |||
| Souche hôte | Plasmide | Longueur moyenne de lecture (n=24 ; précision > 98 %) |
Phred moyen q > 20 bases (n = 24) |
| XL1-blue | pUC19 | 707 | 618 |
| pLH2 | 658 | 623 | |
| JM109 | pUC19 | 706 | 602 |
| pLH2 | 695 | 543 | |
| Séquence de plasmides préparés avec le kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96. Tous les échantillons ont été séquencés en utilisant la chimie BigDye et ont été analysés sur un séquenceur capillaire MegaBACE®. 160 ng de pLH2 et 100 ng de pUC19 ont été respectivement utilisés dans les réactions de séquence. Les produits de réactions ont été purifiés au moyen du kit Montage SEQ384. |
|||
Performance — ADN de BAC
ADN chromosomique
)
L'ADN de trois clones de BAC différents provenant de la banque du chromosome humain 22 (Research Genetics, Inc.) a été purifié en utilisant le kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 et soumis à une électrophorèse sur gel d'agarose 0,8 % pendant 120 min à 100 V, soit non digéré (lignes 1 – 3) soit après digestion par Not I (lignes 4 – 6) ou Hind III (lignes 7 – 9). La ligne M est un fragment digéré par Hind III de l'ADN du phage Lambda. L'ADN de BAC purifié avec le kit Montage Plasmid MiniprepHTS 96 convient au génotypage.