Une excellente séparation avec les colonnes d'HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC

Les colonnes d'HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC sont adaptées à l'analyse des sucres, alcools de sucre et autres hydrates de carbone dans de nombreux types d'échantillons différents. En utilisant un pH plus élevé et des températures supérieures, la vitesse de mutarotation peut être accrue pour éviter une dissociation des pics pour les sucres réducteurs.

Particules à base de silice ou de polymère

Lors de l'utilisation d'une phase stationnaire HILIC zwitterionique greffée, l'élution des composés polaires avec un fort pourcentage de phase organique dans la phase mobile se traduit par une sensibilité maximale de l'analyte et une ionisation supérieure. Les phases stationnaires SeQuant® ZIC®-HILIC sont disponibles avec des particules de silice ou de polymère. Cette dernière offre une plus grande stabilité au pH, elle présente ainsi un avantage pour l'analyse des hydrates de carbone, car de nombreux analytes d'intérêt dépendent du pH. Lors de l'utilisation d'une phase à base de particules de silice, le pH de travail est typiquement de 3-8, tandis que la phase à base de polymère tolère des conditions plus acides et plus basiques.

Élution isocratique à pH neutre

L'utilisation d'un composant de tampon basique, tel que l'hydroxyde d'ammonium, dans la phase mobile facilite la séparation et permet une élution contrôlée des anomères de sucres réducteurs. Cela est illustré par des hydrates de carbone simples séparés aussi bien dans des conditions neutres qu'à un pH élevé, en utilisant une détection par spectrométrie de masse avec ionisation par électronébulisation (ESI-MS). La figure ci-dessous démontre la facilité avec laquelle deux composés modèles, le fructose et le sucrose, sont séparés à n'importe quel pH à l'aide d'une colonne SeQuant® ZIC®-HILIC.

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Élution isocratique à pH élevé

Lors de la séparation de sucres réducteurs, tels que le glucose et le lactose, une mutarotation à pH neutre se produit lentement, entraînant une dissociation des pics et une potentielle élution comme paires isomériques. En revanche, une colonne à base de polymère ZIC®-pHILIC avec une tolérance supérieure au pH associée à un composant de tampon basique, l'hydroxyde d'ammonium, dans la phase mobile se traduit par la fusion des pics (collapse) des anomères du glucose et du lactose. Cela facilite aussi bien la séparation que la détection. Comme on peut le voir sur la figure, des conditions de pH élevé permettent une mutarotation rapide entre les formes isomériques du glucose et du lactose. Cela se traduit par un pic unique, d'une largeur accrue. Les quatre sucres se distinguent facilement de la ligne de base en moins de 4 minutes.

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Élution en gradient à pH élevé

Pour affiner la largeur de pic pour tous les composés modèles, on a exploré une élution en mode gradient. Toutefois, une des difficultés avec l'élution en gradient est que la pression au sein de la colonne change avec le temps, à mesure que la composition de la phase mobile se modifie. Pour dépasser cela, il convient d'augmenter la température de la colonne et de réduire la contribution de la viscosité à la modification de la composition de la phase mobile. À 55 °C, la vitesse de mutarotation s'est accrue, réduisant ainsi la largeur des pics durant la séparation. Comme le montre la figure, une température élevée combinée avec des conditions de pH élevées durant l'élution en gradient à l'aide d'une colonne ZIC®-pHILIC ont entraîné une séparation optimale des quatre analytes de la ligne de base en moins de 3 minutes.

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Identification des hydrates de carbone dans les matrices complexes

Colonnes SeQuant® ZIC®-HILIC pour l'analyse des sucres

• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 100 Å)
  20 × 2,1 mm. En savoir plus
• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 200 Å)
  100 × 2,1 mm. En savoir plus
• SeQuant® ZIC®-HILIC (5 µm, 200 Å)
  150 × 4,6 mm. En savoir plus
• SeQuant® ZIC®-pHILIC (5 µm)
  100 × 2,4 mm. En savoir plus