Mejorando la eficiencia sintética en la síntesis peptídica Fmoc en fase sólida (SPPS Fmoc)

Los dipéptidos de pseudoprolina son indudablemente las herramientas más potentes descritas hasta la fecha para mejorar la eficiencia sintética en la SPPS Fmoc. Se ha observado que el uso sistemático de dipéptidos de pseudoprolina:

• contribuye a evitar costosas e innecesarias repeticiones de síntesis de secuencias fallidas;
• aumenta la pureza de los productos no elaborados;
• simplifica la purificación mediante HPLC;
• aumenta la producción de productos brutos y purificados;
• permite que la síntesis se lleve a cabo a una menor escala.

Inserción del dipéptido de pseudoprolina

La pseudoprolina consiste en un dipéptido en el cual el residuo de Ser o de Thr ha sido reversiblemente protegido como una oxazolidina lábil al ácido trifluoroacético (TFA) semejante a prolina. La inserción de un dipéptido de pseudoprolina en una secuencia altera la formación de las estructuras secundarias que se consideran responsables de los problemas acaecidos durante el ensamblaje del péptido, lo que lleva a una cinética de acilación y de desprotección mejor y más predecible. Los resultados más notables se observan en la preparación de secuencias muy agregadas, donde se ha conseguido multiplicar por 10 el rendimiento del producto como consecuencia de la inserción de una sola pseudoprolina. Sin embargo, las velocidades de reacción mayores y más uniformes benefician también a la síntesis sistemática, proporcionando mayores rendimientos, purezas y solubilidades de los productos brutos, así como una purificación HPLC más fácil con mayor retorno de producto. Para péptidos más largos, se ha observado que la incorporación de diversas pseudoprolinas a intervalos regulares a lo largo de toda la secuencia es particularmente eficaz.

Los dipéptidos de pseudoprolina son extremadamente fáciles de usar. Se introducen en la secuencia peptídica usando métodos de acoplamiento convencionales en sustitución de cualquier dipéptido Aaa-Ser o Aaa-Thr. La experiencia ha llevado al desarrollo de las siguientes directrices empíricas para su uso:

• Se obtienen resultados óptimos si los PP están separados por 5 a 6 restos a lo largo de toda la secuencia.
• La separación óptima entre un PP y un resto de Pro es de 5 a 6 residuos de aminoácidos.
• La separación mínima entre un PP y otro PP o un resto de Pro debe ser de 2 residuos.
• El objetivo es insertar un PP antes de regiones de restos hidrófobos.