Consiga una gran cobertura de secuencia con SeQuant® ZIC®-HILIC

Las columnas de HPLC SeQuant® ZIC® son adecuadas para cartografiar péptidos, en especial cuando se explora la información a partir de fragmentos peptídicos hidrófilos. Gracias a su ventajosa combinación de cromatografía de fase inversa y tecnología HILIC, las columnas proporcionan información complementaria y pueden acoplarse a un enfoque virtual 2D de la cartografía peptídica.

Varios métodos para cartografiar los péptidos

La cromatografía líquida – espectrometría de masas (LC-MS) se utiliza a menudo para cartografiar los péptidos, ya que el lisado de células digeridas suele ser demasiado complejo para el análisis espectromético de masas directo (SM). Lo ideal es la identificación de todos los péptidos de una proteína o mezcla de proteínas digeridas por su espectro MS/MS y su tiempo de retención. Se han desarrollado diversos métodos analíticos, y el enfoque más habitual es la cromatografía de fase inversa (RP). Sin embargo, el poder resolutivo de una sola columna de RP no basta para separar e identificar todos los péptidos presentes.

Ventajas de la separación con SeQuant® ZIC®

Basadas en la combinación de cromatografía de fase inversa (RPLC) y de interacción hidrófila (HILIC), las columnas complementarias para HPLC permiten una cobertura de secuencia mucho mayor que los enfoques de RPLC unidimensionales tradicionales. En varios estudios se ha demostrado que este método proporciona la combinación más ortogonal de las técnicas de separación y la mayor cobertura de espacio de separación 2-D.

Las fases estacionarias anfóteras SeQuant® ZIC® de Merck ofrecen ventajas claras para la cartografía peptídica. En comparación con la cromatografía de fuerte intercambio catiónico (SCX), SeQuant® ZIC® proporciona una resolución cromatográfica significativamente mejor y evita el agrupamiento de péptidos cargados. Dado que la separación con SeQuant® ZIC® depende del pH del tampón, el análisis a pH bajo permite la mejor ortogonalidad con RP y se asemeja a la separación mediante SCX convencional. Sin embargo, condiciones de pH neutro o ligeramente básico permiten una mejor resolución y con ello una adquisición de datos más completa.

Los eluyentes de la HILIC suelen contener un elevado porcentaje de péptidos hidrófobos en disolvente orgánico. Por consiguiente, son en potencia menos propensos a precipitar durante la manipulación de la muestra en la columna que en la cromatografía RP. Esto significa que las columnas de HILIC, pese a aplicarse fundamentalmente para el análisis de moléculas hidrófilas, pueden utilizarse también para identificar péptidos hidrófobos no detectados con una columna de fase inversa. Otra característica de la HILIC es que puede esperarse una mayor sensibilidad para muchas secuencias peptídicas. Esto se debe también al elevado porcentaje de contenido orgánico en la fase móvil, lo que mejora la volatilización en el detector.

El uso de la tecnología SeQuant® ZIC® para cartografiar péptidos se ha demostrado con tres proteínas digeridas con tripsina, la albúmina sérica bovina (BSA), el citocromo C y la ovoalbúmina. Los resultados demuestran una mayor cobertura de secuencia y, por tanto, una mejor caracterización de las proteínas. Pueden encontrarse los vínculos a los documentos y los resultados en la sección "Lecturas recomendadas" a continuación.