96-Well Plasmid und BAC Preparation Kit
Simply clear, concentrate, wash, and recover
Mehr
Simply clear, concentrate, wash, and recover Weniger
More>>
Less<<
Empfohlene Produkte
Überblick
Spezifikationen
Bestellinformationen
Documentation
FAQ
| Frage | Antwort |
|---|---|
| What is holdup volume of a MultiScreen Plate used with the Montage Kits? | The holdup volume for the MultiScreen plate is between 5-20 microliters. |
| When using the Montage kits how can I tell when filtration in the MultiScreen plate is complete? | Filtration is complete when the individual wells of the MultiScreen plate are empty and the membranes appear shiny. |
| The two sections of the MultiScreen plates used in the Montage kits are separating under vacuum. Why? | The most common reason for this problem is the lack of a MultiScreen underdrain support grid in the vacuum manifold. A MultiScreen support grid is required for proper functioning of the MultiScreen plate with any vacuum manifold. |
| The total yields with the Montage Plasmid Miniprep-96 kit seems to be less then with competitive products. Why? | The Montage kit uses less culture volume (1ml vs. 1.3 ml) than most competitive kits. However the relative yield is equivalent. |
| What is the total processing time for plasmid preparation using the Montage kits? | Processing time depends on viscosity of sample, number of manifolds, familiarity with protocol, temperature. (Also, need vacuum capable of 24 in Hg or 812.7 millibar, 609.6 torr.) |
| Can the culture block in the Montage 96 Plasmid prep be autoclaved? | Yes. |
| What is the 260/280 assessment ratio when using the Montage Plasmid Kit? | The 260/280 reading is 1.8-2.0. This signifies and extremely high level of purity. |
| Can I use this kit in centrifugal mode? | Use of the Montage Plasmid Miniprep-96 Kit in a centrifugal protocol is not recommended. |
| I'm using your two plate plasmid prep protocol and the wells are overflowing when I transfer the cleared lysate to the FB plate. What am I doing wrong? | Overflowing can result from any of the following:
|
| I have observed RNA contamination of my plasmid preps. Why? | Failure to add RNase A to solution 1 will often result in RNA contamination in your DNA miniprep. |
Verwandte Produkte & Anwendungen
Verwandte Produkte nach: Application Facete
| Protein Purification |
| Dialysis and Filtration |
Verwandte Produkte nach: Brand Facete
| Montage® |
Kategorien
Das Montage Plasmid Miniprep96 Kit ist ein schnelles, leicht einsetzbares Kit für die Präparation von Plasmid- oder BAC-DNA von hoher Reinheit. Für das Montage Kit, das eine patentierte Technologie für die Abtrennung der DNA verwendet, gilt ein einfaches Protokoll, das langwierige Bindungs-, Elutions- und Zentrifugationsschritte überflüssig macht; damit erhält man reine DNA reproduzierbar in der halben Zeit gegenüber anderen herkömmlichen Verfahren.
Die aufgereinigten PCR-Proben sind für die empfindlichsten Anwendungen geeignet, einschließlich Klonierung, DNA-Sequenzierung und Transformation. Zu den BAC-Anwendungen zählen Sequenzierung, Fingerprinting, Arraying und PCR-Amplifikation.
Das Kit enthält alle Reagenzien und Materialien, die Sie zur Aufreinigung der Plasmid- oder BAC-DNA in einem 96-Well-Format benötigen. Nach der bakteriellen Lyse sind nur noch drei kurze Filtrationsschritte erforderlich, um 96 reine DNA-Proben von jeder Platte zu erhalten.
Das Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit ist ideal für den Einsatz mit automatisierten Liquid Handlern. Das Sammeln der aufgereinigten Probe vom Plattenoberteil aus und das Wegfallen langer Zentrifugationsschritte erhöhen die Kompatibilität des Kits mit einer großen Bandbreite von automatisierten Systemen.
- Zentrifugations- oder Präzipitationsschritte sind nicht erforderlich.
- Minimale Verarbeitungszeit.
- Hervorragende Reinheit, Ausbeute und Reproduzierbarkeit.
- Automatisierung.
Bestandteile des Kits
| Teil | Funktion |
| 96-Well Deep Well Kulturplatte | Wachstum von Wirtsbakterien |
| Plasmid-Platte | Aufreinigung von Plasmid-DNA |
| Lysat-Filtrationsplatte | Aufreinigung des bakteriellen Lysats |
| V-Boden-Lagerplatte | Lagerung von Plasmid-DNA-Proben |
| Klebeband | Abdichten der V-Boden-Lagerplatte |
| RNase A | Erforderlicher Zusatz für Lösung 1 |
| Lösung 1 | Zellresuspension |
| Lösung 2 | Zell-Lyse |
| Lösung 3 | Neutralisation |
| Lösung 4 | Waschen |
| Lösung 5 | Resuspension/Lagerung von Plasmid-DNA |
| Folienversiegelung | Versiegeln der Platten während der Anzucht (müssen durchstochen werden) |
| Weitere Informationen zu den Bestandteilen des Kits finden Sie im Betriebshandbuch des Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kits oder unter www.millipore.com/montage. | |
Protokoll des Plasmid-DNA-Minipreps
Informationen zum BAC-DNA-Protokoll finden Sie im Benutzerhandbuch des Montage Plasmid MiniprepHTS Kits, P36315.
)
| 1. | Nach der bakteriellen Lyse werden die Lysate von der Deep Well Kulturplatte auf die Filtrationsplatte übertragen. Die Lysate werden unter Anlegen von Vakuum in die Plasmid-Filterplatte filtriert. |
| 2. | Die Plasmid-Platte wird auf das Oberteil des Filtrationssystems gestellt und 5 – 7 Minuten lang Vakuum angelegt, um die Probe anzukonzentrieren. Die Plasmid-DNA wird an der Membranoberfläche zurückgehalten, während verunreinigende Substanzen abfiltriert werden. Waschlösung hinzufügen und 3 bis 5 Minuten lang filtrieren. |
| 3. | Resuspensionspuffer hinzufügen und die aufgereinigte Probe durch Aspiration sammeln. |
| 4. | Proben zur Verwendung oder Lagerung in die V-Boden-Platte übertragen. |
Performance — Plasmid-DNA
Hohe Qualität
)
Dieses Agarose-Gel zeigt die Qualität und Konsistenz von Plasmid-DNA, die unter Verwendung des Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kits aufgereinigt wurde (Größenmarker Hind-III-Verdau von λ-DNA).
| Hohe Ausbeuten* | ||
| Wirtsstamm | Plasmid | Ausbeute (µg) |
| XL 1-blue | pUC19 | 2,1 – 6,1 |
| pLH2** | 3,5 – 9,2 | |
| JM109 | pUC19 | 2,4 – 6,4 |
| pLH2** | 3,5 – 9,1 | |
| *Die Ergebnisse hängen vom Wirtsstamm, Plasmid und von den Protokollbedingungen ab. **pLH2 wurde aus pUC19 gewonnen. Das 2,0-kb-Fragment eines Hind-III-Verdaus von λ-Phagen-DNA wurde in die Hind-III-Stelle von pUC19 kloniert. Das Resultat war ein 4,7-kb-Plasmid. |
||
| Zuverlässige Ergebnisse | |||
| Wirtsstamm | Plasmid | Durchschnittliche Leseweite (n=24; > 98%ige Genauigkeit) |
Durchschnitts-Phred q > 20 Basen (n = 24) |
| XL1-blue | pUC19 | 707 | 618 |
| pLH2 | 658 | 623 | |
| JM109 | pUC19 | 706 | 602 |
| pLH2 | 695 | 543 | |
| Sequenzdaten von Plasmiden, die mit dem Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit aufgereinigt wurden. Alle Proben wurden sequenziert unter Verwendung der BigDye-Sequenzierungschemie und die Sequenzreaktionen auf einen MegaBACE®-Kapillarsequenzer aufgetrennt. 160 ng pLH2 und 100 ng pUC19 wurden in den jeweiligen Ansätzen verwendet. Die Sequenzreaktionen wurden unter Verwendung des Montage SEQ384 Kits aufgereinigt. | |||
Performance — BAC-DNA
Chromosomale DNA
)
DNA drei verschiedener BAC-Klone (human chromosome 22 human BAC DNA library, Research Genetics, Inc.) wurde mit dem Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit aufgereinigt und 120 min bei 100 V auf einem 0,8%igen Agarose-Gel elektrophoretisch aufgetrennt, entweder unverdaut (Spur 1 - 3) oder nach Verdau mit Not I (Spur 4 - 6) oder Hind III (Spur 7 - 9). Spur M ist ein Hind-III-Verdau der λ-Phagen-DNA. Die mit dem Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit aufgereinigte BAC-DNA eignet sich für Fingerprinting.