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Ensayos celulares para el estudio del transporte de fármacos

Millicell-96 cell culture insert plate is a patented 96-well device designed to support epithelial cell growth and differentiation of Caco-2 and other cell lines.

Descripción

La unidad Millicell para placas de cultivo celular de 96 pocillos es un dispositivo patentado de 96 pocillos diseñado para optimizar el crecimiento de células epiteliales y la diferenciación de Caco-2 y otras líneas celulares.

Tras la formación de una monocapa diferenciada de células, el dispositivo puede utilizarse para medir la tasa de transporte de fármaco a través de la barrera de células. Todos los protocolos están diseñados para realizarse en un único dispositivo. Los ensayos pueden realizarse con sistemas automatizados en las etapas de siembra y cultivo celular, lavado y experimentos de transporte de fármacos.

El dispositivo Millicell-96 consiste en una placa de filtración con 96 orificios de acceso basolateral, placa de crecimiento (existen placas de un solo pocillo y 96 pocillos), tapa y placa receptora de 96 pocillos.

  • Diseño conforme a las normas ANSI/SBS – El dispositivo Millicell-96 es compatible con sistemas automáticos de manipulación de líquidos y pipetas
  • Resultados fiables – el acceso sencillo apical y basolateral está garantizado
  • Mayor rendimiento – utilizando el sistema de 96 pocillos, el rendimiento aumenta cuatro veces en comparación con los sistemas de 24 pocillos
  • Formato versátil – existen bandejas de alimentación de uno y 96 pocillos

Rendimiento

La tasa de permeabilidad del fármaco se correlaciona con la absorción en humanos

Los diferentes fármacos que representan transportadores activos, pasivos y de eflujo se analizaron en ArQule, Inc. utilizando el sistema de ensayo Millicell-96 (para una lista completa de compuestos, consulte la <i>Application Note</i> Millipore AN1727ES00). La tasa de permeabilidad de cada compuesto se representó gráficamente frente a sus valores de absorción en humanos. Se generó una curva de regresión no lineal con el software Statistica™. La curva resultante proporcionó un buen ajuste a todos los puntos demostrando así que el sistema de ensayo Millicell-96 puede identificar y clasificar correctamente las propiedades de permeabilidad de los 25 compuestos analizados.

Los diferentes fármacos que representan transportadores activos, pasivos y de eflujo se analizaron en ArQule, Inc. utilizando el sistema de ensayo Millicell-96 (para una lista completa de compuestos, consulte la Application Note Millipore AN1727ES00). La tasa de permeabilidad de cada compuesto se representó gráficamente frente a sus valores de absorción en humanos. Se generó una curva de regresión no lineal con el software Statistica™. La curva resultante proporcionó un buen ajuste a todos los puntos demostrando así que el sistema de ensayo Millicell-96 puede identificar y clasificar correctamente las propiedades de permeabilidad de los 25 compuestos analizados.

Las tasas de permeabilidad de los fármacos se correlacionan con los sistemas de ensayo de 24 pocillos

Se midieron las tasas de transporte de 10 fármacos marcados con tritio en el sistema Millicell-96 y se compararon con las tasas de transporte del fármaco de un sistema conocido de 24 pocillos. De esta forma, se comparan los resultados de cuatro experimentos independientes. El valor R<sup>2</sup> de 0,99 sugiere que los datos entre los dos formatos (ensayo de 24 pocillos frente a 96 pocillos de Millipore) se correlacionan. Para ver una lista completa de todos los fármacos analizados, consulte la <i>Application Note</i> de Millipore AN1727ES00.

Se midieron las tasas de transporte de 10 fármacos marcados con tritio en el sistema Millicell-96 y se compararon con las tasas de transporte del fármaco de un sistema conocido de 24 pocillos. De esta forma, se comparan los resultados de cuatro experimentos independientes. El valor R2 de 0,99 sugiere que los datos entre los dos formatos (ensayo de 24 pocillos frente a 96 pocillos de Millipore) se correlacionan. Para ver una lista completa de todos los fármacos analizados, consulte la Application Note de Millipore AN1727ES00.

Resultados reproducibles del ensayo

La baja variabilidad de los métodos de ensayos celulares <i>in vitro</i> es fundamental para obtener resultados fiables en el ensayo. Esta figura examina la reproducibilidad de las tasas de transporte de fármaco en el sistema Millicell-96 utilizando un cultivo de 21 días de células Caco-2 y un único fármaco, propranolol, en los 96 pocillos de cada placa analizada. Las tasas de transporte se determinaron en 3 ciclos experimentales realizados en diferentes días. Cada ciclo de análisis estaba compuesto por placas Millicell-96 provenientes de cuatro lotes diferentes. El análisis de varianza se mantuvo en el promedio de la placa, y las desviaciones estándar tanto inter como intra-placa no difirieron significativamente entre los distintos lotes de producción o entre los distingos días del ensayo. El valor calculado de la desviación estándar total es de 0,3 x 10<sup>-5</sup> cm/seg.

La baja variabilidad de los métodos de ensayos celulares in vitro es fundamental para obtener resultados fiables en el ensayo. Esta figura examina la reproducibilidad de las tasas de transporte de fármaco en el sistema Millicell-96 utilizando un cultivo de 21 días de células Caco-2 y un único fármaco, propranolol, en los 96 pocillos de cada placa analizada. Las tasas de transporte se determinaron en 3 ciclos experimentales realizados en diferentes días. Cada ciclo de análisis estaba compuesto por placas Millicell-96 provenientes de cuatro lotes diferentes. El análisis de varianza se mantuvo en el promedio de la placa, y las desviaciones estándar tanto inter como intra-placa no difirieron significativamente entre los distintos lotes de producción o entre los distingos días del ensayo. El valor calculado de la desviación estándar total es de 0,3 x 10-5 cm/seg.