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Kit e MAPmates™ per studi di trasduzione del segnale
Scelga i kit premiscelati che permettono di esplorare interi processi e pathway. Oppure progetti kit su misura scegliendo le microsfere MAPmates™ single plex e seguendo le linee guida fornite.
Le seguenti MAPmates™ non possono essere dosate insieme: -MAPmates™ che richiedono tamponi differenti per l'analisi. -MAPmate™ fosfo-specifiche e totali, es GSK3β totale e GSK3β (Ser 9). -MAPmates™ PanTyr e sito-specifiche come fosfo-recettore EGF e fosfo-STAT1 (Tyr701). -Più di 1 fosfo-MAPmate™ per un solo bersaglio (Akt, STAT3). -GAPDH e β-Tubulina non possono essere miscelati con kit o MAPmates™ contenenti panTyr.
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96-Well Plate
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48-602MAG
Buffer Detection Kit for Magnetic Beads
1 Kit
Opzione salva-spazio I Clienti che ordinano diversi kit possono scegliere di ridurre lo spazio necessario per lo stoccaggio, rinunciando al confezionamento del kit e ricevendo i vari reagenti per il saggio multiplex in buste di plastica.
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Membrane, sandwich e carta da filtro Immobilon per blotting
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications.ancora
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications. Meno
Mobile Phase Preparation for UHPLC: Membrane Filtration Method Affects System Performance and Leaching of Extractable Impurities Subodh Kulkarn(1), Jesmi George(2) and Vivek Joshi(2) (1) Millipore India Pvt. Ltd., Bioscience Division, 50A, 2nd Phase, Ring Road, Peenya, Bangalore, India 560058 (2) Millipore Corp., Bioscience Division, 17 Cherry Hill Drive, Danvers, MA 01923 LCGC
2009
UHPLC/UPLC® is a revolutionary chromatography technique that is gaining wide acceptance among researchers due to improved resolution, shorter chromatographic runs, and the capability for doing fast method development. The presence of sub-2 µm particles in UHPLC columns provide these benefits but also poses challenges in sample and mobile phase preparation. Particulate impurities in the sample or mobile phase can cause backpressure buildup in the UHPLC system, causing system failure. In fact, most UHPLC instrument vendors recommend filtration of mobile phase using 0.2 µm filters, but there is a lack of data showing the benefits of filtration. In this article we describe the filtration of mobile phases through syringe filters of varying pore size and membrane type, followed by analysis by UHPLC and mass spectrometry. Our results clearly indicate that filtration of mobile phase components using the optimal membrane filter will help protect UHPLC systems from particulate impurities that may clog and shut down the system, increase the sensitivity of detection, and improve the accuracy of quantitation.
Quantitation of Protein on gels and blots by infrared fluorescence of Coomassie blue and fast green Luo S., Wehr N.B., Levine R.L. Analytical Biochemistry:350 (2006):233-238
2005
Immunoblotting (Western)
Role of the Small Heat Shock Proteins in Regulating Vascular Smooth Muscle Tone McLemore E.C., Tessier D.J., Thresher J., Komalavilas P., Brophy C.M J. Am. Coll. Surg. 2005, Vol 201 (1):30-36
2004
Pre-B-cell colony-enhancing factor is a secreted cytokine-like protein from the human amniotic epithelium. Ognjanovic S, Ku TL, Bryant-Greenwood GD. Am J Obstet Gynecol. 2005 Jul;193(1):273-82
2004
Western Blotting
A high-affinity reversible protein stain for Western blots Antharavally B.S., Carter, B., Bell, P.A., Mallia K. Analytical Biochemistry 2004,Vol 329:276-280
2004
Biochemical analysis of GABA receptor subunits alpha 1, alpha 5, beta1 beta2 in the hippocampus of patients with Alzheimer's disease neurophathology Rissman, R.A., Mishizen-Eberz A.J. N.,Wolfe, C.B.B., DeBlas A.L., Miralles C.P., Ikonomovic M.D., armstrong D.M. Neuroscience 120 (2003) 295-705
2003
Western Blotting
Proteomics reveals protein profile changes in doxorubicin treated MCF7 human breast cancer cells Cheng S.T., Pan T, L., Tsai Y.Ch, Huang C. M. Cancer letters 2002. vol 181:95-107
2002
Towards proteome-wide production of monoclonal antibody by phage display. Bin Liu, Lan Huang, Carina Sihlbom, Al Burlingame and James D. Marks. J Mol Biol. 2002 Feb 1;315(5):1063-73
2002
Mass Spectrometry Sample Prep
Characterization of retinoic acid receptor-deficient keratinocytes. Goyette Philippe; Chen Chang Feng; Wang Wei; Seguin Francois; Lohnes David(a) Journal of Biological Chemistry v 275 pg 16497-16505 June 2, 2000
1999
Protection of renal inner medullary epithelial cells from apoptosis by hypertonic stress-induced p53 activation Dmitrieva Natalia(a); Kultz Dietmar; Michea Luis; Ferraris Joan; Burg Maurice ; Journal of Biological Chemistry v 275, pg 18243-18247 June 16, 2000 Journal of Biological Chemistry v 275, pg 18243-18247 June 16, 2000
1999
Should I prewet MultiScreen Immobilon-P plates before use?
Yes. Use 15 ul of 70% ethanol or methanol to prewet the Immobilon P membrane. This membrane is hydrophobic and requires a prewet to allow liquid to pass through the membrane.
What is the protein binding capacity of Immobilon-P?
The protein (BSA) binding capacity for the Immobilon P membrane is 131 micrograms per sq. cm. of membrane.
What is the thickness of the Immobilon PSQ?
Immobilon PSQ is 200 microns thick.
Can ethanol be substituted for methanol in the Western Blot procedure?
Yes, it is acceptable to replace the methanol with ethanol as long as you substitue it 1 for 1. So 20% methanol would be replaced with 20% ethanol.
What is the smallest size of a protein or peptide which binds to the Immobilon-PSQ?
For the PSQ we do not suggest that they go lower than 2 kDa for the protein size. To help promote the transfer of the smaller proteins the methanol concentration of the transfer buffer can be increased to 20% (w/v) and the SDS lowered to 0.01%. The strength of the electric field can also be reduce by 50% to increase the proteins contact time with the membrane. Standard stains can be used such as Coomasie Blue and Ponceau. Keep in mind that some of the stain such as Coomasie Blue are not reversible.
How many times can I strip and reprobe Immobilon-P?
While 2-3 times is probably the limit, it is difficult to give an absolute number in regards to stripping and reprobing. This is because there are many factors to consider when it comes to protein binding to PVDF and primary antibody affinity to these proteins. Different proteins will have varying degrees of affinity to PVDF. This is based on factors discussed in our Protein Blotting Handbook (see TP001; Protein Binding section). One round of stripping may remove one protein and leave another intact. The same could occur when using different primary antibodies. Different antibodies will have varying affinities to different proteins. If carrying out several rounds of stripping and reprobing, one strategy might be to detect the least abundant proteins earlier leaving the higher abundant proteins later for detection.
What is the difference between Immobilon–FL and Immobilon-P?
Both membranes are made from PVDF. The difference in background fluorescence is due to proprietary modifications in the membrane manufacturing process.
How does the protein binding capacity and protein retention of Immobilon-FL compare to Immobilon-P?
Immobilon-FL’s protein binding capacity and protein retention are comparable to Immobilon-P.
Is Immobilon-FL better than Nitrocellulose membrane for Fluorescence detection?
Yes. Background fluorescence of Immobilon-FL is typically 2-5X lower than that of nitrocellulose, thus improving signal-to-noise ratio (sensitivity). Nitrocellulose membranes have other disadvantages. If allowed to dry out, they become brittle, tend to fracture and are difficult to handle. They are not recommended for stripping and re-probing. Nitrocellulose blots need to be scanned as soon as possible after detection, as diffusion of signal on a wet membrane may also occur.
What fluorescence-based detection methods can be used with Immobilon-FL?
Immobilon-FL can be used in Western blotting applications using either fluorescent dye-conjugated antibodies or chemi-fluorescence substrates. Western blots can be imaged in the visible or IR range. Single color detection or multiplexing for co-localization studies can be performed efficiently on Immobilon-FL Fluorescent proteins, e.g. green fluorescent protein, (GFP) or proteins tagged with GFP, blotted onto the membrane can be readily detected as well.
Millipore offre tre diverse membrane in PVDF, ciascuna ottimizzata per una diversa applicazione del blotting di proteine. Ora sono disponibili anche i sandwich per blotting costituiti da fogli di membrana pre-tagliati, intervallati da carta da filtro per blotting.
Rispetto alla nitrocellulosa, le membrane Immobilon offrono un gran numero di vantaggi. Non si spaccano, non si arricciano e possono essere tagliate senza che si rompano. Inoltre, sono caratterizzate da maggiore capacità di legame verso le proteine, basso background, ampia compatibilità con i solventi e capacità di colorazione superiore. Infine, possono essere sottoposte a reprobing diverse volte.
Membrane Immobilon-P
Pori da 0,45 µm
Consigliate per la maggior parte dei casi di western blotting, specialmente per proteine > 20 kDa
Il protocollo Millipore di immunorivelazione rapida, eliminando la necessità di bloccaggio della membrana e diverse fasi di lavaggio, consente di ridurre i tempi di rivelazione anche di 2 ore, senza alcuna perdita di sensibilità o specificità
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Membrane Immobilon-PSQ
Pori da 0,2 µm e maggiore superficie interna
Maggiore adsorbimento proteico e rese di sequenziamento più elevate rispetto alle altre membrane
Consigliate per il blotting di proteine < 20 kDa
Evitano la perdita per attraversamento delle proteine con basso peso molecolare
Membrane Immobilon-FL
Le prime membrane da blotting ottimizzate per i metodi di rivelazione in fluorescenza
La fluorescenza di fondo estremamente ridotta migliora la sensibilità con tutti i protocolli di rivelazione in fluorescenza
Compatibili con tutte le comuni sonde fluorescenti, qualunque siano la lunghezza d'onda di eccitazione e di emissione
Ideali per applicazioni multiplex e di chemifluorescenza
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Sandwich per blotting
I sandwich per blotting sono particolarmente comodi e consentono di risparmiare parecchio tempo quando si devono effettuare numerosi blot. Sono costituiti da fogli di membrana Immobilon-P intervallati da fogli pre-tagliati di carta da blotting di grado cromatografico.
Carta da filtro per blotting
Fogli pre-tagliati di carta da blotting di grado cromatografico nelle dimensioni più comuni per i sistemi di western blotting.
Prestazioni
Protocollo di immunorivelazione rapida con membrane Immobilon-P
Fase
Immunorivelazione standard
Immunorivelazione rapida
1. Bloccaggio della membrana
1 ora
No
2. Incubazione con anticorpo primario
1 ora
1 ora
3. Lavaggi della membrana
3 x 10 min
3 x 5 min
4. Incubazione con anticorpo secondario
1 ora
30 min
5. Lavaggi della membrana
3 x 10 min
3 x 5 min
6. Aggiunta del substrato
5 min
5 min
Tempo complessivo
4 ore e 5 min
2 ore e 5 min
Le membrane Immobilon-PSQ evitano il fenomeno della perdita di proteine per attraversamento
Standard di peso molecolare (corsie 1, 3, 5, 7) e lisato di fegato di vitello (corsie 2, 4, 6, 8) sono stati trasferiti su membrane Immobilon-P e Immobilon-PSQ. Un foglio di membrana Immobilon-PSQ è stato collocato dietro alle membrane primarie, per catturare eventuali proteine in grado di attraversarle (corsie 5 e 6 dietro la membrana Immobilon-P; corsie 7 e 8 dietro la Immobilon-PSQ).
Le membrane Immobilon-FL sono ottimizzate per la fluorescenza
Rivelazione di actina-tubulina in multiplex su membrana Immobilon-FL. L'actina da muscolo di coniglio (rossa) è stata rivelata utilizzando come anticorpo primario un monoclonale di coniglio anti-actina e come secondario un monoclonale di capra anti-coniglio QDot® 655. La tubulina da cervello suino (verde) è stata rivelata utilizzando come anticorpo primario un monoclonale di topo anti-tubulina e come secondario un monoclonale di capra anti-topo QDot 565. Per entrambi gli analiti si è osservata una sensibilità massima di 7 ng. Dati forniti da Quantum Dot Corporation.
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