Separazioni di qualità superiore con le colonne per HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC

Le colonne per HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC possono essere utilizzate per l'analisi di zuccheri, polioli e di altri carboidrati in numerosi tipi di campione. Utilizzando pH e temperature più elevate, è possibile aumentare la velocità di mutarotazione degli zuccheri riducenti, evitando lo sdoppiamento dei picchi.

Particelle del supporto in silice e polimeriche

Utilizzando una fase stazionaria zwitterionica legata per cromatografia HILIC, l'eluizione dei composti polari con fasi mobili contenenti un'elevata percentuale di solvente organico consente di raggiungere la massima sensibilità analitica ed una ionizzazione di grado superiore. Le fasi stazionarie SeQuant® ZIC®-HILIC consentono di scegliere tra particelle di supporto in silice o polimeriche; queste ultime offrono maggiore stabilità al pH, il che è vantaggioso per l'analisi dei carboidrati, molti dei quali pH dipendenti. Con le particelle in silice, il pH d'esercizio deve essere solitamente mantenuto tra 3 e 8, mentre un materiale polimerico tollera anche condizioni più spiccatamente acide o basiche.

Eluizione isocratica a pH neutro

L'impiego nella fase mobile di un componente tampone basico, come l'idrossido d'ammonio, agevola la separazione ed è fondamentale per controllare l'eluizione degli anomeri degli zuccheri riducenti. Ciò è confermato dalla separazione di carboidrati semplici sia in condizioni di pH neutro, sia a pH elevato, utilizzando la spettrometria di massa con ionizzazione per elettronebulizzazione (ESI-MS). per la rivelazione. La figura che segue dimostra come due delle sostanze modello, fruttosio e saccarosio, vengono facilmente separate a qualunque pH con una colonna  ZIC®-HILIC.

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Eluizione isocratica ad alti pH

Quando si separano zuccheri riducenti, come glucosio e lattosio, a pH neutri la mutarotazione avviene lentamente, determinando lo sdoppiamento dei picchi e, potenzialmente, l'eluizione di una coppia di isomeri. Invece, utilizzando una colonna polimerica con maggiore resistenza al pH, come la colonna SeQuant® ZIC®-pHILIC, con una fase mobile contenente una sostanza tampone basica, come l'idrossido d'ammonio, gli anomeri del glucosio e del lattosio collassano, agevolando sia la separazione che la rivelazione. Come mostra la figura, a pH elevati la mutarotazione tra le due forme isomeriche del glucosio e del lattosio è rapida, generando un solo picco, sebbene allargato. Tutti i quattro zuccheri vengono facilmente separati alla linea di base in meno di 4 minuti.

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Eluizione su gradiente ad alti pH

Per cercare di ottenere picchi più stretti per tutti i composti modello, si è provata l'eluizione su gradiente; si è, però, presentato un ostacolo, cioè la pressione della colonna variava nel tempo, al variare della composizione della fase mobile. Per mitigare questo fenomeno, si deve aumentare la temperatura della colonna, riducendo così l'influenza esercitata dalla variazione di viscosità della fase mobile. A 55°C, la velocità della mutarotazione aumentava, collassando i picchi durante la separazione. Come mostra la figura, la combinazione di temperatura e pH elevati durante l'eluizione su gradiente con una colonna SeQuant® ZIC®-pHILIC ha prodotto un'ottima separazione alla linea di base di tutti i quattro analiti in 3 minuti.

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Identificazione dei carboidrati nelle matrici difficili

Colonne SeQuant® ZIC®-HILIC per l'analisi degli zuccheri

• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 100 Å)
  20×2,1 mm. Per saperne di più
• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 200 Å)
  100×2,1 mm. Per saperne di più
• SeQuant® ZIC®-HILIC (5 µm, 200 Å)
  150×4,6 mm. Per saperne di più
• SeQuant® ZIC®-pHILIC (5 µm)
  100×2,4 mm. Per saperne di più