| Colonne | Colonne de CLHP Purospher® STAR RP-18 endcapped (5 µm) LiChroCART® 150-4,6 |
|---|---|
| Phase mobile | Méthanol/eau 80:20 |
| Débit | 1,0 ml/min |
| Détection | UV 254 nm |
| Température | 30° C |
| Volume d'injection |
10 μl |
| Échantillon | 1. Uracile 2. Butylbenzène 3. o-terphényl 4. Pentylbenzène 5. Triphénylène |
 |
Test de Tanaka |
Caractérisation chromatographique des propriétés des colonnes
Il est important de contrôler les propriétés physiques et chimiques des phases stationnaires. Cependant, seule une caractérisation chromatographique complète peut garantir un niveau élevé et constant de reproductibilité. Différentes approches ont été utilisées par les scientifiques spécialistes de la CLHP pour évaluer la sélectivité.
Le test de Tanaka* est reconnu mondialement comme étant la norme de référence du secteur pour évaluer la sélectivité et les performances des diverses colonnes de CLHP. Ces paramètres simplifient non seulement la comparaison des colonnes, mais ils facilitent également le choix de la colonne de CLHP la mieux adaptée à une séparation donnée.
Un ensemble de sept substances sélectionnées est utilisé pour décrire la capacité, l'hydrophobicité, la sélectivité stérique et les propriétés silanophiles. Les valeurs de ces paramètres sont représentées sur les six axes d'un hexagone, illustrant la qualité d'un sorbant du premier coup d'œil.
Plus l'hexagone est symétrique et plus sa surface est grande, plus l'ensemble des propriétés chromatographiques de la phase stationnaire est équilibrée.
* Prof. Tanaka, Kyoto Institute of Technology, J. of Chrom. Sci. 27, 725, 1989
Paramètres selon Tanaka pour la caractérisation des sorbants de CLHP Purospher®
| Paramètres | Propriété de la phase stationnaire | Facteurs de préparation de la phase stationnaire | |
|---|---|---|---|
| k (pentylbenzène) 80 % méthanol |
Capacité de rétention (A) |
Nombre de chaînes alkyles | Surface de silice Couverture de silice |
| k (pentylbenzène) / k (butylbenzène) 80 % méthanol |
Hydrophobicité (B) | Capacité hydrophobe (Sélectivité pour le groupe CH2) |
Couverture de surface |
| k (triphénylène) / k (o-terphényle) 80 % méthanol |
Sélectivité stérique (C) | Sélectivité stérique (forme) | Fonctionnalité silane Couverture de surface |
| k (caféine) / k (phénol) 30 % méthanol |
Capacité silanol (D) | Capacité silanol (teneur et type de silanols) | Silanols résiduels Endcapping Couverture de surface |
| k (benzylamine) / k (phénol) 30 % méthanol/ 70 % tampon phosphate pH 7,6 |
Capacité d'échanges d'ions (E) | Capacité d'échange d'ions à pH 7 |
Silanols résiduels Sites actifs à pH 7 |
| k (benzylamine) / k (phénol) 30 % méthanol / 70 % tampon phosphate pH 2,7 |
Capacité d'échanges d'ions (F) | Capacité d'échange d'ions à pH 3 |
Sites actifs à pH 3 Traitement de silice base (impuretés métal) |
Test Tanaka pour Purospher® STAR RP-18 endcapped
Tanaka 1 : capacité de rétention, hydrophobicité, sélectivité stérique
Le test de Tanaka 1 décrit la capacité de rétention, l'hydrophobicité et la sélectivité stérique des phases RP.
Tanaka 2 : capacité silanol
Le test de Tanaka 2 (chromatogramme A) illustre les propriétés silanophiles des phases stationnaires. Le chromatogramme B ne fait pas partie du test de Tanaka 2. Le test phénol/pyridine mesure les activités du silanol.
Tanaka 3 et 4 : capacité d'échange d'ions
Le résultat du test de Tanaka 3 (à bas pH) montre si la désactivation des groupes silanol résiduels est complète. Le test de Tanaka 4 (à pH élevé) indique l'absence totale de métaux dans le sorbant de base.
Test de Tanaka de Purospher® STAR RP-18 endcapped
Par comparaison aux autres marques de colonnes R-18 endcapped de « haute pureté », la colonne Purospher STAR RP-18 endcapped présente la meilleure sélectivité globale, ce qui en fait le choix idéal pour des séparations de CLHP réussies.
| A. | K (pentylbenzène) | 9,59 |
| B. | α (pentylbenzène/butylbenzène) | 1,51 |
| C. | α (triphénylène/o-terphényl) | 1,63 |
| D. | α (caféine/phénol) | 0,44 |
| E. | α (benzylamine/phénol ; pH 7,6) | 0,23 |
| F. | α (benzylamine/phénol ; pH 2,7) | 0,02 |
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