Colonne |
Colonne de CLHP Purospher® STAR RP-18 endcapped (3 µm) LiChroCART® 55-2 |
|---|---|
Phase mobile A |
0,1 % acide acétique dans de l'acétonitrile |
Phase mobile B |
0,1 % acide acétique dans de l'eau |
Gradient |
De 25 % A à 50 % A en 3 minutes, puis isocratique |
Débit |
300 µl, sans split |
Détection |
UV 220 nm, MS à trappe d'ions |
| Température | Ambiante |
Volume d'inj. |
1 µl |
| Échantillon | Kétoprofène, Fénoprofène, Ibuprofène ; 0,1 µg/µl |
| Conditions de MS | |
| Ionisation | ESI(-) |
| Buse de nébulisation | 36 psi |
| Gaz sec | 8,5 l/min |
| Température sèche | 330 °C |
| Optimisation du mode smart |
Masse cible 205 |
Contrôle de la charge d'ions |
Cible 50,000, max. 50 ms |
| Mode de mesure | Standard/Normal |
| Gamme de mesure | 50-600 m/z |
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Colonnes Purospher® STAR RP-18 Endcapped pour les applications de LC-MS |
Les pics de masse « fantômes » représentent une difficulté couramment observée dans la chromatographie en phase liquide en gradient suivie par la spectrométrie de masse (LC-MS). Il est impossible de déterminer si les pics fantômes proviennent d'un composé inconnu présent dans l'échantillon, d'une impureté de la phase mobile ou de lessivage de la phase liée. Cependant, un procédé à trois étapes peut vous permettre d'éviter les faux pics de LC-MS et d'obtenir régulièrement des séparations de CLHP sans pics fantômes. Ce simple procédé implique le nettoyage des colonnes et le choix de solvants adaptés pour la LC-MS. Ces étapes augmentent l'efficacité de l'ionisation, ce qui améliore la sensibilité et la reproductibilité des résultats de LC-MS.
Un procédé simple à trois étapes pour optimiser les performances de la LC-MS
- Rincer la colonne pendant 60 minutes avec un mélange spécial de solvants pour éliminer les éventuelles impuretés. Le solvant recommandé pour laver le système LC-MS est de l'isopropanol contenant 0,1 % d'acide formique à un débit de 0,5 ml/min (pour les colonnes à d.i. de 3 mm).
- Pour réduire le bruit de fond en LC-MS, utiliser des solvants de la plus haute pureté. Le solvant recommandé est le LiChrosolv® Hypergrade avec des spécifications particulières pour la spectrométrie de masse.
- Enfin, la colonne doit être rééquilibrée avec la phase mobile. Pour de meilleurs résultats, faire passer deux gradients de solvant à blanc (sans injecter d'échantillons) dans le système avant l'analyse. Les colonnes de CLHP Purospher® STAR RP-18 endcapped produisent un bruit de fond très faible et stable dans la LC-MS après un simple lavage par isopropanol / 0,1 % acide formique.
Chromatogrammes extraits d'ions de « profènes » en mode ions négatifs, séparés sur colonne Purospher® STAR RP-18 Endcapped
L'association des solvants LiChrosolv® acétonitrile Hypergrade et des colonnes Purospher® STAR RP-18 endcapped illustre l'absence de pics fantômes dans un spectre de MS pour le kétoprofène, le fénoprofène et l'ibuprofène (100 ng).
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