| Colonne | Colonnes de CLHP Purospher® RP-18 HC (5 µm) LiChroCART® 125-4 | |
|---|---|---|
| Phase mobile | Méthanol/eau 55/45 (v/v) | |
| Débit | 1,0 ml/min | |
| Température | ambiante | |
| Détection | UV 254 nm | |
| Échantillon | 1. Thiourée 2. Aniline 3. Phénol 4. p-, m-, o-éthylaniline 5. N,N-Diméthylaniline 6. Ethylbenzoate 7. Toluène 8. Ethylbenzène |
à basique acide basique basique neutre neutre neutre |
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Test d'Engelhardt |
Hydrophobicité et activité des groupes silanol des phases stationnaires Purospher®
Le test d'Engelhardt a été réalisé sur diverses phases stationnaires Purospher® afin de déterminer leur sélectivité. Le test à 8 composés développé par Engelhardt et al.* est devenu une procédure standard pour l'évaluation de l'hydrophobicité et de l'activité silanophile des garnitures de colonne chromatographie en phase inversée. Le toluène et l'éthylbenzène mettent en évidence les propriétés hydrophobes, alors que le phénol et le benzoate d'éthyle évaluent les interactions polaires neutres. Le comportement important vis-à-vis des composés basiques est évalué grâce à l'injection de 5 anilines différentes. Si la suppression de l'activité silanol de la phase stationnaire est efficace, l'aniline doit être éluée avant le phénol avec une forme de pics excellente et les isomères géométriques de l'éthylaniline doivent co-éluer.
* Engelhardt et al., Chromatographia 29, 59, 1990
Purospher® RP-18
En raison de l'endcapping des groupes amino des colonnes Purospher® RP-18 et des interactions polaires avec les analytes, la coélution des isomères géométriques de (p-, m-, o-) éthylaniline (4) n'a pas pu être observée. Les deux anilines (2, 5) éluent sous forme de pics symétriques, ce qui indique que la colonne Purospher® RP-18 convient parfaitement pour la séparation des analytes fortement basiques.
Purospher® RP-18 Endcapped
En raison de l'absence d'interactions polaires sur la surface, Purospher® RP-18 endcapped présente une coélution parfaite des p-, m- et o-éthylanilines (4). Les deux anilines (2, 5) éluent avec des pics symétriques, ce qui montre que la colonne convient parfaitement pour la séparation des analytes fortement basiques. Le temps de rétention élevé de l'éthylbenzène (8) reflète l'hydrophobicité de la phase stationnaire.
Purospher® STAR RP-18 Endcapped
Purospher® STAR RP-18 endcapped présente une coélution parfaite des p-, m- et o-éthylanilines (4), ce qui indique l'absence d'interactions polaires en raison de l'activité silanol à la surface. Les deux anilines (2, 5) éluent symétriquement, ce qui montre que la colonne convient parfaitement pour la séparation des composés fortement basiques. Purospher® STAR RP-18 endcapped présente une sélectivité similaire à Purospher® RP-18 endcapped, mais possède une plage de pH plus étendue.
Purospher® RP-18 HC
Grâce à l'absence d'endcapping de la phase liée, Purospher® RP-18 HC présente des interactions polaires très claires avec les silanols résiduels sur la surface. L'aniline et le phénol (2, 3) éluent en un seul pic tandis que les composés basiques montrent une rétention élevée mais une perte au niveau des performances. C'est pourquoi cette colonne est parfaitement adaptée pour la séparation des analytes polaires, non basiques, comme les explosifs par exemple.
Purospher® STAR RP-8 Endcapped
En raison des interactions polaires dues à la fine couche hydrophobe avec les courtes chaînes C-8, la colonne Purospher® STAR RP-8 endcapped ne présente aucune co-élution des p, m et o-éthylaniline (4). Les anilines (2, 5) éluent sous forme de pics symétriques, ce qui montre que la colonne convient très bien pour la séparation des composés fortement basiques. Le benzoate d'éthyle (6) et le toluène (7) éluent en un seul pic, ce qui est typique des phases stationnaires à chaînes C-8.
Propriétés chromatographiques de la phase stationnaire Purospher®
| Symétrie des pics des agents complexants | Interactions polaires | Sélectivité stérique | Sélectivité pour le groupe CH2 | Activité du groupe silanol | Hydrophobicité | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Purospher® RP-18 | +++ | ++ | +++ | +++ | ++ | + |
| Purospher® RP-18 Endcapped | +++ | - | +++ | +++ | - | +++ |
| Purospher® STAR RP-18 Endcapped | +++ | - | +++ | +++ | - | +++ |
| Purospher® STAR RP-8 Endcapped | +++ | + | + | ++ | ++ | + |
| Purospher® RP-18 HC | +++ | ++ | +++ | +++ | + | ++ |
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