Rezeptor-Bindungsstudien
MultiScreenHTS plates provide the benefits of filtration in a convenient, automation-friendly, 96-well format.
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Überblick
Rezeptor-Bindungsstudien sind ein entscheidender Bestandteil der Identifizierung und späteren Charakterisierung potentieller Arzneimittel. Sie werden zur Charakterisie rung der meisten bekannten therapeutischen Ziele eingesetzt und machen im Allgemeinen von filterbasierender Separations technologie Gebrauch, um notwendige "free vs. bound"-Fraktionen für die Assay-Validierung zu erhalten. Zur Messung der Sensitivität und Spezifität werden in kompetitiven Bindungs studien bekannte, radioaktiv markierte Wirkstoffe eingesetzt. Der Assay ist als eine kompetitive Inhibitionsstudie konzipiert, wobei die radioaktiv markierte und bekannte Wirkstoff/Liganden-Rezeptor-Inter aktion verwendet wird, um chemische oder natürliche Produkte aus Molekularbanken für den Erhalt effektiverer NCEs (neuer chemischer Entitäten) einem Screening zu unterziehen.
Diese quantitativen Bindungsparameter-Bestimmungen geben die minimalen effektiven Arzneimittelkonzentrationen an. Für quanti tative Bindungsparameter bieten MultiScreenHTS Platten eine exaktere und zuverlässigere Alternative zu homogenen Assays. Sie finden breiten Einsatz in Hochdurchsatz-Screening kampagnen und stellen ein zuverlässiges System dar, das mit einer Reihe von Glasfaser filtern ausgestattet ist, um den Rezeptor und die gebundene Liganden fraktion zurückzuhalten. Der Einsatz des Vakuum-Filtrationssystems ist praktischer, da die gebundenen Fraktionen leicht vom Platten oberteil aufgenommen werden können.
Das verbesserte Plattendesign der automationskompatiblen MultiScreenHTS Filterplatten erleichtert den Einsatz von Greifarmen und ist mit Mikroplatten-Scintillationszählern kompatibel.
MultiScreen Harvest Platten stehen ebenfalls zur Verfügung, um den für Zell Harvest Protokolle erforderlichen zahlreichen Wasch schritten und der PEI-Vorbehandlung standzuhalten.
- Hochempfindliche und -spezifische radiometrische Assays
- Mit flüssigem Scintillations-Cocktail kompatibel
- Verbesserte Automationskompatibilität mit den neuen MultiScreenHTS Filterplatten
Protokoll
| 1. | Zellen, Membran oder Gewebe in die MultiScreen Platte geben. |
| 2. | Mit markiertem Liganden inkubieren. |
| 3. | Rezeptor/Liganden-Verbindung auf der Filtermembran sammeln. Waschen und zählen. Bei einer |
Leistung
Optimiertes Design für erstklassige Ergeb nisse
Verdrängung des humanen Muscarinic-M1-Rezeptors in einem 384-Well-System
Verdrängung des humanen Muscarinic-M1-Rezeptors in einem 96-Well-System
Die Radioliganden-Verdrängungs-Studien wurden mit einer konstanten, radioaktiv markierten Scopolamin-Konzentration (0,6 nM) und serienmäßigen Verdünnungen unmarkierten Pirenzipins angesetzt. Im Vergleich dazu wurde als Kontrolle ein Bindungsexperiment ohne unmarkiertes Pirenzipin (% der Kontrolle) durchgeführt. Links: Die Verdrängungsreaktion wurde mit 4,38 µg Rezeptorzubereitung in 100 µl unter Einsatz der MultiScreenHTS 384-Well-Filterplatte durchgeführt. Die vorgestellten Ergebnisse stammen von drei un terschiedlichen, jeweils in Dreifach-Wells durchgeführten Experimenten. Rechts: Die Verdrängungs reaktion wurde mit 8,75 µg Rezeptor zubereitung in 200 µl unter Einsatz der MultiScreen 96-Well-Filterplatte durchgeführt. Die relativen Affinitäts werte (IC50) wurden durch das Anpassen der Verdrängungs-Inhibitionswerte durch nicht-lineare Regression unter Verwendung von Prism™ Datensoftware bestimmt. Alle Daten punkte entsprechen dem Durchschnitt von Dreifach-Experimenten. Vor der Hinzugabe von Supermix™ (10 µl in 384-Well-Platten und 50 µl in 96-Well-Platten) wurden die Filterplatten getrocknet. Die Zählung wurde in einem MicroBeta® Trilux durchgeführt. ANMERKUNG: Die gesamte Zählung wurde sowohl in 96- als auch 384-Well-Platten mit Underdrain vorgenommen.