Montage® Antikörper-Aufreinigungs-Kits
Designed for fast and easy antibody purification from serum, ascites or cell culture supernatants.
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Empfohlene Produkte
Überblick
Spezifikationen
Bestellinformationen
Documentation
Literatur
| Übersicht |
|---|
| Antibody Purification with Affinity Spin Columns Kavonian, Mark,BioScience Technology, July 2003 BioScience Technology, July 2003 2003 |
| Considerations During Development of a Protein A-Based Antibody Purification Process Iyer et al.,Biopharm, January 2002, pp 14-20 Biopharm, January 2002, pp 14-20 2002 |
| A sensitive enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA) for the detection of staphylococcal prtein A (SpA) present as a trace contaminant of murine immunoglobulins purified on immobilized protein A Miguel A.J. Godfrey, Piotr Kwasowski, Roland Clift and Vincent Marks Journal of Immunological Methods, 149(1992) 21-27, 1992 1992 |
FAQ
| Frage | Antwort |
|---|---|
| What is the shelf life of the Prosep A and Prosep G spin columns? | The spin columns/media are under warranty for 2 years provided they are stored at 2-8 C. |
| Do I need to filter the buffers provided with the Montage Antibody Purification kit? | The buffers supplied with the kit are pre-filtered for immediate use. |
| Do I need to pre-filter my sample before loading it onto a Prosep A or ProSep G spin column? | All samples must be filtered through a 0.22 mm filter immediately before loading the sample onto the column. We recommend using a Steriflip-GP 0.22 mm filter. |
| What is the binding capacity of the Prosep A spin column? | Using the Prosep A spin columns we have been able to bind >20 mg of Rabbit IgG. |
| What is the maximum volume I can load onto the Prosep A and Prosep G spin columns? | You can load up to 20 ml in a Prosep A or Prosep G sping column for a swinging bucket rotor and up to 10 ml for a fixed angle rotor. We recommend that you spin it in a swinging bucket rotor. |
| Why do you suggest that the Prosep A spin columns be spun at 100-150 xg for 20 minutes? | The low speed, twenty minute centrifugation maximizes IgG / resin contact which increases IgG binding efficiency. |
| Can I use a fixed angle rotor or a swinging bucket rotor with the Prosep A and Prosep G spin columns? | Swing bucket rotors are recommended because they provide uniform flow through the resin. For optimal performance with a fixed angle rotor, ensure that the orientation of the Prosep A spin coulmn is the same for all steps. Also please note that the maximum sample loading volume for a fixed angle rotor is ten ml versus twenty ml with a swinging bucket rotor. |
| What is the minimum elution volume for the Prosep A and Prosep G spin columns? | We suggest 10 ml. Smaller volumes can be used but they may result in incomplete IgG recovery. If you use a smaller volume the neutralization buffer volume should also be adjusted accordingly. |
| How do I regenerate the Prosep A spin columns? | We recommend that you wash the plugs with 10 ml of Elution Buffer B2 by centrifuging at 500 xg got 5 minutes. re-equilibrate the media with 5 ml of Binding Buffer A by centrifuging the spin column at 500 xg for 2 minutes. Proceed to step 1 of the antibody purification protocol for immediate re-use or store the plugs without their end caps in 5 ml of Binding Buffer a in a 15 ml screw-capped tube for future use. |
| Can I autoclave the Prosep A and Prosep G spin columns? | The Prosep A and Prosep G spin columns cannot be autoclaved. |
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Produktfamilien
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| Dialysis and Filtration |
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| Montage® |
| ProSep® |
Kategorien
Montage Antikörper-Aufreinigungs-Kits sind für die schnelle und einfache Aufreinigung von Antikörpern aus Serum, Ascites oder Nähr lösungen konzipiert. Die Kits bestehen aus Zentrifugations-Säulen, die mit leistungsstarken PROSEP-A oder -G Medien vorgepackt sind. Sie benötigen keine Pumpen. Kein Packen der Säulen. Sie brauchen lediglich eine Zentrifuge zur Aufreinigung von 10 - 20 mg in weniger als 60 Minuten.
Das Protokoll ist leicht anwendbar und der Einsatz von Zentrifugation für die Aufreinigung im Gegensatz zu herkömmlichen Gravitations flussverfahren benutzerfreundlich.
Die Ergebnisse zeigen, dass die Zentri fugations-Säulen ohne Verlust von Bindungs kapazität oder verringerte Spezifität bis zu 10-mal regeneriert werden können.
Leistung
Wiederverwendung der Zentrifugations-Säule
)
Menschliches IgG wurde 10-mal aus normalem Serum unter Einsatz einer regenerierten PROSEP-G Zentrifugations-Säule aufgereinigt.
Aufreinigung monoklonaler Antikörper
)
Monoklonales Maus-IgG wurde mit einer PROSEP-A Zentrifugations-Säule aus Ascites aufgereinigt. (Spur 1: unaufgereinigte Ascites. Spur 2: Erstes Eluat nach Auftragen der Aszites. Spur 3: Eluat nach Waschvorgang. Spur 4: 5 µg aufgereinigter Antikörper.) Mit freundlicher Genehmigung von Exalpha Biologicals.
| Bindungsaffinitäten von Protein A und Protein G | ||||||
| Protein | A | G | Protein | A | G | |
| Menschliches IgG1 | ++ | ++ | Ratten-IgM | + /-- | - | |
| Menschliches IgG2 | ++ | ++ | Hasen-IgG | ++ | ++ | |
| Menschliches IgG3 | -- | ++ | Hamster-IgG | + | ++ | |
| Menschliches IgG4 | ++ | ++ | Meerschweinchen-IgG | ++ | + | |
| Menschliches IgA | + | -- | Rind-IgG | + | + | |
| Menschliches IgD | + | -- | Schaf-IgG | + / -- | + | |
| Menschliches IgE | + | -- | Ziegen-IgG | + /-- | + | |
| Menschliches IgM | + | -- | Schwein-IgG | ++ | ++ | |
| Maus-IgG1 | + | + | Huhn-IgG | -- | + /-- | |
| Maus-IgG2a | ++ | ++ | Fragmente | |||
| Maus-IgG2b | ++ | ++ | Menschliches Fab | + | + | |
| Maus-IgG3 | + | ++ | Menschliches F(ab')2 | + | + /-- | |
| Maus-IgM | + /-- | -- | Menschliches ScFv | + | -- | |
| Ratten-IgG | ++ | ++ | Menschliches Fc | + | -- | |
| Ratten-IgG1 | + /-- | + | Menschliches K | -- | -- | |
| Ratten-IgG2a | + /-- | ++ | Menschliches | -- | + | |
| Ratten-IgG2b | + /-- | + | ||||
| Ratten-IgG2c | + /-- | + | ||||
| Legende: ++ = Starke Affinität; + = Mäßige/leichte Affinität; +/-- = Erfordert Austesten; -- = Keine Affinität | ||||||
| Kit-Inhalt | Bestehend aus: Zentrifugations-Säulen, Puffern, Probenvorbereitungs- und Konzentrierungseinheiten | |
| Unterstützendes Matrixmaterial | Poröses Glas | |
| Medienpartikelgröße, µm | 75 µm–125 µm | |
| Medienbettvolumen, µl | 1.6 mL | |
| Bindungskapazität | ||
| Protein A | >20 mg Hasen-IgG | |
| Protein G | >10 mg Hasen-IgG | |
| pH-Wert-Bereich | pH2 – pH9 | |
| Maximales Volumen, ml | 20 mL (maximum in swinging bucket rotor) | |
| Lagertemperatur | ||
| Farbringkodierte Endkappen | ||
| Protein A | Rot | |
| Protein G | Gelb | |