Kits Montage® Antibody Purification
Designed for fast and easy antibody purification from serum, ascites or cell culture supernatants.
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Références bibliographiques
| Aperçu de la référence bibliographique |
|---|
| Antibody Purification with Affinity Spin Columns Kavonian, Mark,BioScience Technology, July 2003 BioScience Technology, July 2003 2003 |
| Considerations During Development of a Protein A-Based Antibody Purification Process Iyer et al.,Biopharm, January 2002, pp 14-20 Biopharm, January 2002, pp 14-20 2002 |
| A sensitive enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA) for the detection of staphylococcal prtein A (SpA) present as a trace contaminant of murine immunoglobulins purified on immobilized protein A Miguel A.J. Godfrey, Piotr Kwasowski, Roland Clift and Vincent Marks Journal of Immunological Methods, 149(1992) 21-27, 1992 1992 |
FAQ
| Question | Réponse |
|---|---|
| What is the shelf life of the Prosep A and Prosep G spin columns? | The spin columns/media are under warranty for 2 years provided they are stored at 2-8 C. |
| Do I need to filter the buffers provided with the Montage Antibody Purification kit? | The buffers supplied with the kit are pre-filtered for immediate use. |
| Do I need to pre-filter my sample before loading it onto a Prosep A or ProSep G spin column? | All samples must be filtered through a 0.22 mm filter immediately before loading the sample onto the column. We recommend using a Steriflip-GP 0.22 mm filter. |
| What is the binding capacity of the Prosep A spin column? | Using the Prosep A spin columns we have been able to bind >20 mg of Rabbit IgG. |
| What is the maximum volume I can load onto the Prosep A and Prosep G spin columns? | You can load up to 20 ml in a Prosep A or Prosep G sping column for a swinging bucket rotor and up to 10 ml for a fixed angle rotor. We recommend that you spin it in a swinging bucket rotor. |
| Why do you suggest that the Prosep A spin columns be spun at 100-150 xg for 20 minutes? | The low speed, twenty minute centrifugation maximizes IgG / resin contact which increases IgG binding efficiency. |
| Can I use a fixed angle rotor or a swinging bucket rotor with the Prosep A and Prosep G spin columns? | Swing bucket rotors are recommended because they provide uniform flow through the resin. For optimal performance with a fixed angle rotor, ensure that the orientation of the Prosep A spin coulmn is the same for all steps. Also please note that the maximum sample loading volume for a fixed angle rotor is ten ml versus twenty ml with a swinging bucket rotor. |
| What is the minimum elution volume for the Prosep A and Prosep G spin columns? | We suggest 10 ml. Smaller volumes can be used but they may result in incomplete IgG recovery. If you use a smaller volume the neutralization buffer volume should also be adjusted accordingly. |
| How do I regenerate the Prosep A spin columns? | We recommend that you wash the plugs with 10 ml of Elution Buffer B2 by centrifuging at 500 xg got 5 minutes. re-equilibrate the media with 5 ml of Binding Buffer A by centrifuging the spin column at 500 xg for 2 minutes. Proceed to step 1 of the antibody purification protocol for immediate re-use or store the plugs without their end caps in 5 ml of Binding Buffer a in a 15 ml screw-capped tube for future use. |
| Can I autoclave the Prosep A and Prosep G spin columns? | The Prosep A and Prosep G spin columns cannot be autoclaved. |
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Catégories
Les kits Montage Antibody Purification permettent une purification facile et rapide des anticorps du sérum, d'ascites ou de surnageants de cultures cellulaires. Les kits comprennent des colonnes à centrifuger pré-remplies de résine PROSEP-A ou G à haute capacité de fixation. Il n'y a pas de pompe à monter, pas de colonne à remplir. Une simple centrifugeuse suffit pour purifier 10–20 mg en moins de 60 minutes.
Le protocole est facile à respecter et contrairement aux méthodes traditionnelles basées sur un flux par gravité, la purification par centrifugation permet de s'éloigner de la paillasse.
L'expérience montre que les colonnes à centrifuger peuvent être régénérées jusqu'à 10 fois sans aucune perte de capacité de liaison ni réduction de la spécificité.
Performances
Réutilisation de la colonne à centrifuger
)
L'IgG humaine purifiée 10 fois à partir de sérum normal au moyen d'une colonne à centrifuger PROSEP-G régénérée.
Purification de MAb
)
L'IgG monoclonale de souris a été purifiée au moyen d'une colonne à centrifuger PROSEP-A à partir d'ascites. (Ligne 1 : ascites non purifiés. Ligne 2 : flux continu d'ascites. Ligne 3 : flux continu de lavage. Ligne 4 : 5 µg d'anticorps purifié). Avec l'aimable autorisation d'Exalpha Biologicals.
| Affinités de liaison de la protéine A et de la protéine G | ||||||
| Protéine | A | G | Protéine | A | G | |
| IgG1 humaine | ++ | ++ | IgM de rat | + /-- | - | |
| IgG2 humaine | ++ | ++ | IgG de lapin | ++ | ++ | |
| IgG3 humaine | -- | ++ | IgG d'hamster | + | ++ | |
| IgG4 humaine | ++ | ++ | IgG de cochon d'inde | ++ | + | |
| IgA humaine | + | -- | IgG de bovin | + | + | |
| IgD humaine | + | -- | IgG de mouton | + / -- | + | |
| IgE humaine | + | -- | IgG de chèvre | + /-- | + | |
| IgM humaine | + | -- | IgG de cochon | ++ | ++ | |
| IgG1 de souris | + | + | IgG de poulet | -- | + /-- | |
| IgG2a de souris | ++ | ++ | Fragments | |||
| IgG2b de souris | ++ | ++ | Fab humain | + | + | |
| IgG3 de souris | + | ++ | F(ab')2 humain | + | + /-- | |
| IgM de souris | + /-- | -- | ScFv humain | + | -- | |
| IgG de rat | ++ | ++ | Fc humain | + | -- | |
| IgG1 de rat | + /-- | + | K humain | -- | -- | |
| IgG2a de rat | + /-- | ++ | humain | -- | + | |
| IgG2b de rat | + /-- | + | ||||
| IgG2c de rat | + /-- | + | ||||
| Légende : ++ = forte affinité ; + = affinité modérée/faible ; +/-- = nécessite une évaluation ; -- = pas d'affinité | ||||||
| Contenu du kit | Comprend des colonnes à centrifuger, des tampons, des unités de préparation et de concentration des échantillons | |
| Matériaux de support de la matrice | Verre poreux | |
| Taille des particules, µm | 75 µm–125 µm | |
| Volume du lit de résine, µl | 1.6 mL | |
| Capacité de fixation | ||
| Protéine A | >20 mg d'IgG de lapin | |
| Protéine G | >10 mg d'IgG de lapin | |
| Gamme de pH | pH2 – pH9 | |
| Volume maximum, ml | 20 mL (maximum in swinging bucket rotor) | |
| Température de stockage | ||
| Bouchons à code couleur | ||
| Protéine A | Rouge | |
| Protéine G | Jaune | |