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Konfigurierbare Panels & Premixed-Kits
Unser breites Angebot enthält Multiplex-Panels, für die Sie die Analyten auswählen können, die am besten für Ihre Anwendung geeignet sind. Unter einem separaten Register können Sie das Premixed-Cytokin-Format oder ein Singleplex-Kit wählen.
Kits für die zelluläre Signaltransduktion & MAPmates™
Wählen Sie gebrauchsfertige Kits zur Erforschung gesamter Signalwege oder Prozesse. Oder konfigurieren Sie Ihre eigenen Kits mit Singleplex MAPmates™.
Die folgenden MAPmates™ sollten nicht zusammen analysiert werden: -MAPmates™, die einen unterschiedlichen Assaypuffer erfordern. -Phosphospezifische und MAPmate™ Gesamtkombinationen wie Gesamt-GSK3β und Gesamt-GSK3β (Ser 9). -PanTyr und locusspezifische MAPmates™, z.B. Phospho-EGF-Rezeptor und Phospho-STAT1 (Tyr701). -Mehr als 1 Phospho-MAPmate™ für ein einziges Target (Akt, STAT3). -GAPDH und β-Tubulin können nicht mit Kits oder MAPmates™, die panTyr enthalten, analysiert werden.
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Custom Premix Selecting "Custom Premix" option means that all of the beads you have chosen will be premixed in manufacturing before the kit is sent to you.
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96-Well Plate
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Weitere Reagenzien hinzufügen (MAPmates erfordern die Verwendung eines Puffer- und Detektionskits)
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48-602MAG
Buffer Detection Kit for Magnetic Beads
1 Kit
Platzsparende Option Kunden, die mehrere Kits kaufen, können ihre Multiplex-Assaykomponenten in Kunststoffbeuteln anstelle von Packungen erhalten, um eine kompaktere Lagerung zu ermöglichen.
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Immobilon Transfermembranen, Sandwiches und Blotting-Filterpapier
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications.Mehr
Immobilon® PVDF membranes are the ideal transfer membranes for protein blotting applications. Weniger
Millipore bietet drei verschiedene Immobilon PVDF-Membranen an, von denen jede für unterschiedliche Protein-Blotting-Anwen dungen optimiert ist. Wir bieten nun auch Blotting Sandwiches an, die mit vorgeschnittenen Membranblättern und Blotting-Filterpapier ausgestattet sind.
Immobilon Membranen zeigen eine Reihe von Vorteilen gegenüber Nitrocellulose. Sie reißen nicht, wellen sich nicht und können ohne Brechen geschnitten werden. Sie zeigen auch geringeren Hintergrund, eine breite Lösungsmittel kompatibilität und ein optimiertes Färbungs vermögen. Reprobing kann zudem viele Male durchgeführt werden.
Immobilon-P Membran
Porengröße 0,45 µm
Empfohlen für die meisten Western-Blotting-Anwendungen, besonders für Proteine mit einem Molekulargewicht > 20 kDa
Millipores Rapid Immunodetection Protokoll verringert die Nachweiszeiten um bis zu 2 Stunden, indem es das Blocken der Membran und mehrere Waschschritte überflüssig macht, ohne dabei an Sensitivität oder Spezifität einzubüßen.
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Immobilon-PSQ Membran
Porengröße von 0,2 µm und große strukturinterne Oberfläche
Höhere Protein-Adsorption und bessere Ergebnisse bei der Protein-Sequenzierung als andere Membranen
Empfohlen für das Blotting von Proteinen mit einem Molekulargewicht < 20 kDa
Verhindert das Durchwandern von Proteinen mit geringem Molekulargewicht durch die Membran.
Immobilon-FL Membran
Die erste für Fluoreszenzanwendungen optimierte Transfermembran
Extrem schwacher Hintergrund verbessert die Sensitivität aller Fluoreszenz-Nachweisprotokolle.
Kompatibel mit allen herkömmlich verwendeten Fluoreszenz-Sonden bei allen Anregungs- und Emissionswellenlängen
Ideal für Multiplexing- und Chemifluoreszenz-Anwendungen
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Blotting Sandwiches
Wenn Sie eine Vielzahl von Blots durchführen müssen, stellen Blotting Sandwiches eine praktische, zeitsparende Lösung dar. Unsere Sandwiches bestehen aus Blättern einer Immobilon-P Membran, die sich mit vorgeschnittenen Blättern eines Blotting-Filterpapiers ("chromatography-grade") abwechseln.
Blotting-Filterpapier
Blotting-Filterpapier ("chromatography-grade"), das auf die gebräuchlichsten Western-Blotting-Größen zugeschnitten ist.
Leistung
Rapid Immunodetection Protokoll mit Immobilon-P Membran
Schritt
Standard Immunodetection
Rapid Immunodetection
1. Blocken der Membran
1 h
Kein
2. Inkubation mit primärem Antikörper
1 h
1 h
3. Waschen der Membran
3 x 10 min
3 x 5 min
4. Inkubation mit sekundärem Antikörper
1 h
30 min
5. Waschen der Membran
3 x 10 min
3 x 5 min
6. Hinzufügen des Substrats
5 min
5 min
Gesamtzeit
4 h 5 min
2 h 5 min
Immobilon-PSQ Membran verhindert das Durchwandern von Proteinen durch die Membran
Molekulargewichts-Marker (Spur 1, 3, 5, 7) und Kalbsleberlysate (Spur 2, 4, 6, 8) wurden auf Immobilon-P oder Immobilon-PSQ Membranen transferiert. Ein Blatt einer Immobilon-PSQ Membran wurde hinter den primären Membranen angebracht, um durchgewanderte Proteine aufzu fangen (Spur 5 und 6 hinter Immobilon-P; Spur 7 und 8 hinter Immobilon-PSQ).
Immobilon-FL Membran ist für Fluoreszenz optimiert.
Paralleler Nachweis von Aktin und Tubulin auf Immobilon-FL Membran mit zwei unterschiedlichen fluoreszenzmarkierten Antikörpern (Multiplexing). Hasenmuskel-Aktin (rot) wurde unter Verwendung eines Hasen-Anti-Aktin-Antikörpers (1. AK) und QDot® 655 Ziegen-Anti-Hasen-Antikörpers (2. AK) nachgewiesen. Schweinehirn-Tubulin (grün) wurde unter Verwendung von Maus-Anti-Tubulin-Antikörper (1. AK) und QDot® 565 Ziegen-Anti-Maus-Antikörper (2. AK) nachgewiesen. Von beiden Analyten konnten bis zu 7 ng Protein nachgewiesen werden. Daten von Quantum Dot Corporation erstellt.
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Blotting Membranes
Spezifikationen
Bestellinformationen
Documentation
Literatur
Übersicht
Anwendung
Mobile Phase Preparation for UHPLC: Membrane Filtration Method Affects System Performance and Leaching of Extractable Impurities Subodh Kulkarn(1), Jesmi George(2) and Vivek Joshi(2) (1) Millipore India Pvt. Ltd., Bioscience Division, 50A, 2nd Phase, Ring Road, Peenya, Bangalore, India 560058 (2) Millipore Corp., Bioscience Division, 17 Cherry Hill Drive, Danvers, MA 01923 LCGC
2009
UHPLC/UPLC® is a revolutionary chromatography technique that is gaining wide acceptance among researchers due to improved resolution, shorter chromatographic runs, and the capability for doing fast method development. The presence of sub-2 µm particles in UHPLC columns provide these benefits but also poses challenges in sample and mobile phase preparation. Particulate impurities in the sample or mobile phase can cause backpressure buildup in the UHPLC system, causing system failure. In fact, most UHPLC instrument vendors recommend filtration of mobile phase using 0.2 µm filters, but there is a lack of data showing the benefits of filtration. In this article we describe the filtration of mobile phases through syringe filters of varying pore size and membrane type, followed by analysis by UHPLC and mass spectrometry. Our results clearly indicate that filtration of mobile phase components using the optimal membrane filter will help protect UHPLC systems from particulate impurities that may clog and shut down the system, increase the sensitivity of detection, and improve the accuracy of quantitation.
Quantitation of Protein on gels and blots by infrared fluorescence of Coomassie blue and fast green Luo S., Wehr N.B., Levine R.L. Analytical Biochemistry:350 (2006):233-238
2005
Immunoblotting (Western)
Role of the Small Heat Shock Proteins in Regulating Vascular Smooth Muscle Tone McLemore E.C., Tessier D.J., Thresher J., Komalavilas P., Brophy C.M J. Am. Coll. Surg. 2005, Vol 201 (1):30-36
2004
Pre-B-cell colony-enhancing factor is a secreted cytokine-like protein from the human amniotic epithelium. Ognjanovic S, Ku TL, Bryant-Greenwood GD. Am J Obstet Gynecol. 2005 Jul;193(1):273-82
2004
Western Blotting
A high-affinity reversible protein stain for Western blots Antharavally B.S., Carter, B., Bell, P.A., Mallia K. Analytical Biochemistry 2004,Vol 329:276-280
2004
Biochemical analysis of GABA receptor subunits alpha 1, alpha 5, beta1 beta2 in the hippocampus of patients with Alzheimer's disease neurophathology Rissman, R.A., Mishizen-Eberz A.J. N.,Wolfe, C.B.B., DeBlas A.L., Miralles C.P., Ikonomovic M.D., armstrong D.M. Neuroscience 120 (2003) 295-705
2003
Western Blotting
Proteomics reveals protein profile changes in doxorubicin treated MCF7 human breast cancer cells Cheng S.T., Pan T, L., Tsai Y.Ch, Huang C. M. Cancer letters 2002. vol 181:95-107
2002
Towards proteome-wide production of monoclonal antibody by phage display. Bin Liu, Lan Huang, Carina Sihlbom, Al Burlingame and James D. Marks. J Mol Biol. 2002 Feb 1;315(5):1063-73
2002
Mass Spectrometry Sample Prep
The clinical usefulness of the measurement of cytokines. Bienvenu J et al.,Clin Chem Lab Med. 2000 Apr;38(4):267-85. Review. Clin Chem Lab Med. 2000 Apr;38(4):267-85. Review.
1999
ELISPOT Assays
Amino Acid Analysis: A comparative Study of stains on PVDF membranes ,Journal of Biomolecular Techniques, Vol II, Issue 1, March 2000. Journal of Biomolecular Techniques, Vol II, Issue 1, March 2000.
1999
I transferred my protein to Immobilon-P and I can't find it. I've stained the gel and the membrane and nothing is there. What happened?
If the pI of your proteins are greater than the pH of the transfer buffer, the proteins will travel in the opposite direction. The protein probably transferred into the running buffer. If you suspect that your protein has a high pI, try CAPS buffer and/or put membrane on both sides of the gel.
How can I elute protein off Immobilon-P?
Several methods have been used depending on the nature of the study. Proteins can be eluted from the membrane by incubation at room temp. in 50 mMTris-HCL, pH 9, containing 2% SDS and 1% Triton X-100, followed by dialysis to remove most of the detergents. If the eluted protein is to be purified by HPLC, hydrogenated Triton-X-100 should be used as it will not contribute any UV absorbence to the chromatogram. If detergents in the protein solution are a problem, a 40% acetonitrile solution in 0.1 M ammonium acetate, pH 8.9 for 3 hours at 37oC can be used to elute the proteins. Lyophilization of the extract will remove the volatile solvents. If the eluted protein is to be purified by HPLC, hydrogenated Triton-X-100 should be used as it will not contribute any UV absorbence to the chromatogram.
If I do a dot blot with Immobilon-P should I prewet the membrane?
A dot blot can be done in two ways, via vacuum filtration with a dot blot apparatus or through intrusion with a tuberculin syringe. With the first method, the membrane must first be rendered hydrophilic using methanol (this allows the protein to adsorb onto the membrane) followed by a quick soak in water prior to assembly in the apparatus. When using the second method it isn't necessary to prewet with methanol. The user simply holds the syringe directly against the membrane and lets the pressure exerted from the syringe intrude the solution ( and protein) onto the membrane.
What is the sensitivity of the transillumination method with Immobilon-P and how does it work?
The sensitivity of transillumination is equivalent to Coomassie Blue staining. After drying the membrane, the PVDF is re-wet in 20% methanol and viewed in white light, or placed in a tray containing 20% methanol on a white light transillumination box.
This method takes advantage of the change in refractive index of the rehydrated protein band to that of the water/methanol solution. The naturally hydrophobic Immobilon P membrane will not re-wet and, therefore can be visualized by the difference of refractive indices. The protein pattern appears translucent against the white membrane.
How can I strip Immobilon-P?
Processing a single blot with multiple antibodies requires the removal of the first antibody prior to the addition of a second antibody preparation. The stripping method should effectively disrupt the antigen-binding capacity of the antibody and solubilize it into the surrounding buffer. For most immunodetection procedures, it is also important to prevent spurious binding of the secondary antibody during stripping so that the enzyme conjugate will not contribute to background in subsequent rounds of detection. Finally, the stripping method should not cause a loss of antigens from the membrane. Two methods are provided for stripping an immunoblot. http://www.millipore.com/publications.nsf/docs/tp001en00protocols.
Can I use Coomasie Blue G-250 to stain my protein blots instead of Coomasie Blue R-250 (Brilliant Blue) which is recommended in your literature?
Coomasie Blue G-250 will work, however, be aware that it will not have the same intensity and contrast as the R-250 will. The difference is caused by the way the stain interacts with the protein. G-250 doesn't give the same level of binding as the R-250. Bands may look light with the G-250, but keep in mind that the protein could still be there at a higher concentration than the stain would indicate.
Can Ponceau-S be used to stain proteins transfered to Immobilon-P?
Ponceau-S can be used with Immobilon-P and is reversible. The stain produces pinkish bands on a light background. The stain can be removed by washing the blot with 0.1N NaOH.
What are the important factors to consider when choosing a stain for use with Immobilon-P?
The most important factor in choosing a stain is how the proteins on the blot are to be analyzed. For example, if immunodetection analysis will follow, non-reversible stains are not recommended. Non-reversible stains generally exhibit the best sensitivity but can interfere with or prevent further analysis of the proteins. Although less sensitive, reversible stains allow assessment fo the blot and then can be washed from the membrane. However, there is a risk that some proteins may undergo chemical modification during the process or be washed from the membrane.
My pre-stained protein markers disappear when I transfer my Western blot. What's happening?
Some of the dyes used in pre-stained markers are very hydrophilic and the dyed protein may travel faster and penetrate more deeply into the membrane than the undyed protein. You can still check for the presence of your protein by transillumination of the membrane (after blot is dry, soak in 20% methanol for 5 minutes, and view translucent protein bands on a light box).
I want to strip my immunoblot and probe with another antibody. The rapid immunodetection protocol states that the membrane should be dry, but the stripping protocol states that the membrane should not be allowed to dry. What should I do?
You dry the blot after transfer, and perform your rapid immunodetection protocol. Then, if you are planning to do rounds of immunodetection with other antibodies, you must keep the the blot wet after immunodetection is complete and continue with stripping off the first antibody. After that, you can proceed to the blocking step of the next round of immunodetection with the other antibody. Do not let the blot dry between rounds of immunodetection, otherwise, any residual antibodies from the first round will bind permanently to the membrane.
