Engelhardt-Test

Hydrophobizität und Silanolaktivität der stationären Phasen der Purospher®-Säulen

Zur Überprüfung der Selektivitäten wurde mit den stationären Phasen verschiedener Purospher®-Säulen der Engelhardt-Test durchgeführt. Dieser von Engelhardt et al.* entwickelte 8-Verbindungen-Test ist einer der Standardtests zur Beurteilung der Hydrophobizität und der silanophilen Aktivität der Füllung von Umkehrphasensäulen. Während Toluol und Ethylbenzol hydrophobe Eigenschaften aufweisen, stellen Phenol und Ethylbenzoat neutrale polare Wechselwirkungen her. Das kritische Verhalten gegenüber basischen Verbindungen wird durch Injektion fünf verschiedener Aniline beurteilt. Bei guter Unterdrückung der Silanolaktivität der stationären Phase wird das Anilin mit ausgezeichneter Peakform vor dem Phenol eluiert, und die geometrischen Isomere von Ethylanilin koeluieren.

* Engelhardt et al., Chromatographia 29, 59, 1990

Purospher® RP-18

Aufgrund des Amino-Endcappings der Purospher® RP-18 und polaren Wechselwirkungen mit den Analyten konnte die Koelution der geometrischen Isomere von (p-, m-, o-) Ethylanilin (4) nicht beobachtet werden. Beide Aniline (2, 5) eluieren als symmetrische Peaks und zeigen damit die hervorragende Eignung von Purospher® RP-18 für die Trennung stark basischer Analyte.

Engelhardt-Test für Purospher® RP-18

Säule	Purospher® RP-18 (5 µm) LiChroCART® 125–4 HPLC-Säulen
Mobile Phase	Methanol/Wasser 55/45 (v/v)
Flussrate	1,0 ml/min
Temperatur	Umgebungstemperatur
Detektion	UV 254 nm
Probe	1. Thioharnstoff 2. Anilin 3. Phenol 4. p-, m-, o-Ethylanilin 5. N,N-Dimethylanilin 6. Ethylbenzoat 7. Toluol 8. Ethylbenzen	Bis basisch Sauer basisch basisch neutral neutral neutral

Purospher® RP-18 mit Endcapping

Da an der Oberfläche keine polaren Wechselwirkungen auftreten, zeigt die Purospher® RP-18-Säule mit Endcapping eine perfekte Koelution von p-, m- und o-Ethylanilinen (4). Beide Aniline (2, 5) eluieren mit symmetrischer Peakform, was die hervorragende Eignung für die Trennung stark basischer Analyte belegt. Die hohe Retentionszeit von Ethylbenzol (8) zeigt die Hydrophobizität der stationären Phase.

Engelhardt-Test für Purospher® RP-18 mit Endcapping

Säule	Purospher® RP-18 (5 µm) mit Endcapping LiChroCART® 125–4 HPLC-Säule
Mobile Phase	Methanol/Wasser 55/45 (v/v)
Flussrate	1,0 ml/min
Temperatur	Umgebungstemperatur
Detektion	UV 254 nm
Probe	1. Thioharnstoff 2. Anilin 3. Phenol 4. p-, m-, o-Ethylanilin 5. N,N-Dimethylanilin 6. Ethylbenzoat 7. Toluol 8. Ethylbenzen	Bis basisch Sauer basisch basisch neutral neutral neutral

Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping

Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping weist eine perfekte Koelution der p-, m- und o-Ethylaniline (4) auf, was darauf hinweist, dass aufgrund der Silanolaktivität an der Oberfläche keine polaren Wechselwirkungen auftreten. Beide Aniline (2, 5) eluieren symmetrisch. Dies belegt die hervorragende Eignung für die Trennung stark basischer Verbindungen. Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping weist eine ähnliche Selektivität wie Purospher® RP-18 mit Endcapping auf, hat jedoch einen größeren pH-Bereich.

Engelhardt-Test für Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping

Engelhardt-Test für Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping

Säule	Purospher® STAR RP-18 mit Endcapping (5 µm)
Mobile Phase	Methanol/Wasser 55/45 (v/v)
Flussrate	1,0 ml/min
Temperatur	RT
Detektion	UV 254 nm
Probe	1. Thioharnstoff 2. Anilin 3. Phenol 4. p-, m-, o-Ethylanilin 5. N,N-Dimethylanilin 6. Ethylbenzoat 7. Toluol 8. Ethylbenzen	Bis basisch Sauer basisch basisch neutral neutral neutral

Purospher® RP-18 HC

Da bei der gebundenen Phase kein Endcapping vorliegt, zeigt Purospher® RP-18 HC sehr deutliche Wechselwirkungen mit den Restsilanolen an der Oberfläche. Anilin und Phenol (2, 3) eluieren als ein einziger Peak, während die basischen Verbindungen eine erhöhte Retention – allerdings mit Leistungsverlusten – zeigen. Daher ist diese Säule für die Trennung von polaren, nicht basischen Analyten wie z. B. Sprengstoffen geeignet.

Engelhardt-Test für Purospher® RP-18 HC

Säule	Purospher® RP-18 HC (5 µm) LiChroCART® 125–4 HPLC-Säule
Mobile Phase	Methanol/Wasser 55/45 (v/v)
Flussrate	1,0 ml/min
Temperatur	RT
Detektion	UV 254 nm
Probe	1. Thioharnstoff 2. Anilin 3. Phenol 4. p-, m-, o-Ethylanilin 5. N,N-Dimethylanilin 6. Ethylbenzoat 7. Toluol 8. Ethylbenzen	Bis basisch Sauer basisch basisch neutral neutral neutral

Purospher® STAR RP-8 mit Endcapping

Da es aufgrund der dünnen hydrophoben Beschichtung mit kurzen C8-Ketten zu polaren Wechselwirkungen kommt, zeigt die Purospher® STAR RP-8 mit Endcapping keine Koelution von p-, m- und o-Ethylanilinen (4). Beide Aniline (2, 5) eluieren mit symmetrischen Peaks, was die hervorragende Eignung für die Trennung stark basischer Verbindungen belegt. Ethylbenzoat (6) und Toluol (7) eluieren beide in einem einzigen Peak; dies ist typisch für C-8-Phasen.

Engelhardt-Test für Purospher® STAR RP-8 mit Endcapping

Säule	Purospher® STAR RP-8 mit Endcapping (5 µm) LiChroCART® 125-4 HPLC-Säule
Mobile Phase	Methanol/Wasser 55/45 (v/v)
Flussrate	1,0 ml/min
Temperatur	RT
Detektion	UV 254 nm
Probe	1. Thioharnstoff 2. Anilin 3. Phenol 4. p-, m-, o-Ethylanilin 5. N,N-Dimethylanilin 6. Ethylbenzoat 7. Toluol 8. Ethylbenzen	Bis basisch Sauer basisch basisch neutral neutral neutral

Chromatographische Eigenschaften der stationären Phasen von Purospher®