Separación superior con columnas de HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC

Las columnas para HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC son apropiadas para el análisis de azúcares, alcoholes de azúcar y otros carbohidratos en muchos tipos diferentes de muestras. Utilizando valores de pH y de temperatura más elevados puede aumentarse la velocidad de mutarrotación para evitar la división del pico en los azúcares reductores.

Partículas de núcleo de sílice y de polímero

Cuando se utiliza una fase estacionaria anfótera enlazada para HILIC, la elución de los compuestos polares utilizando fase móvil con elevado porcentaje de contenido orgánico produce una máxima sensibilidad al analito y una ionización superior. Las fases estacionarias SeQuant® ZIC®-HILIC están disponibles con partículas de núcleo de sílice o partículas de núcleo de polímero. La última ofrece una mayor estabilidad al pH, por lo que es una ventaja para los análisis de carbohidratos, ya que muchos analitos de interés son dependientes del pH. Utilizando una partícula de núcleo de sílice, el intervalo de pH de trabajo suele ser de 3 a 8, mientras que el material polimérico tolera condiciones más ácidas y más básicas.

Elución isocrática a pH neutro

El uso de un componente amortiguador básico, como el hidróxido de amonio, en la fase móvil ayuda a la separación y permite la elución controlada de los anómeros de los azúcares reductores. Esto queda ilustrado por la separación de carbohidratos simples en condiciones neutras y a un pH elevado utilizando detección mediante espectrometría de masas con ionización por electrospray (ESI-MS). En la figura siguiente se demuestra lo fácil que se separan a cualquier pH dos de los compuestos modelo, la fructosa y la sacarosa, utilizando una columna SeQuant® ZIC®-HILIC.

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Elución isocrática a pH elevado

Al separar azúcares reductores como la glucosa y la lactosa, la mutarrotación a pH neutro se produce lentamente, lo que provoca un desdoblamiento del pico y una posible elución como pares de isómeros. Por el contrario, una columna SeQuant® ZIC®-pHILIC polimérica con mayor tolerancia al pH, combinada con un componente amortiguador básico, el hidróxido de amonio, en la fase móvil produce el desprendimiento de los anómeros de glucosa y lactosa, lo que ayuda a la vez a la separación y a la detección. Como se ve en la figura, condiciones de pH elevado permiten una mutarrotación rápida entre las formas isoméricas de la glucosa y la lactosa, lo que provoca un pico único, aunque ensanchado. Se produce con facilidad una separación basal de los cuatro azúcares en menos de 4 minutos.

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Elución en gradiente a pH elevado

Con el fin de reducir la anchura del pico para todos los compuestos del modelo se exploró la elución en gradiente. Sin embargo, un obstáculo con este tipo de elución es que la presión de la columna cambia con el tiempo a medida que se altera la composición de la fase móvil. Para resolver este problema, debe aumentarse la temperatura de la columna y reducir la contribución de la composición de la fase móvil cambiante a la viscosidad. A 55 °C, había aumentado la velocidad de mutarrotación, reduciéndose así la anchura de los picos durante la separación. Como se observa en la figura, una temperatura elevada combinada con condiciones de pH alto durante la elución en gradiente, utilizando una columna SeQuant® ZIC®-pHILIC produce una separación basal óptima de los cuatro analitos en 3 minutos.

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Identificación de carbohidratos en matrices difíciles

Columnas de HPLC SeQuant® ZIC®-HILIC para análisis de azúcares

• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 100 Å)
  20 × 2,1 mm. Más información
• SeQuant® ZIC®-HILIC (3,5 µm, 200 Å)
  100 × 2,1 mm. Más información
• SeQuant® ZIC®-HILIC (5 µm, 200 Å)
  150 × 4,6 mm. Más información
• SeQuant® ZIC®-pHILIC (5 µm)
  100 × 2,4 mm. Más información