Identificación sencilla de carbohidratos - Incluso en matrices difíciles

SeQuant® ZIC® es el absorbente ideal para la separación y la extracción de glucanos y glucopéptidos. Se recomienda un tamaño de poro de 200 Å para evitar efectos de exclusión por tamaño como consecuencia del volumen hidrodinámico relativamente grande de las estructuras glucano hidratadas. Las columnas para HPLC de DI pequeño son adecuadas para los métodos LC/MS, mientras que las dimensiones de las columnas convencionales son más apropiadas para separaciones de estructuras glucano marcadas detectadas con otras técnicas.

Introducción a la glucómica de proteínas y a la glucoproteómica

La unión de monosacáridos a las proteínas, conocida como glucosilación de las proteínas, es una modificación postraduccional (PTM) abundante. Está ampliamente aceptado que la glucosilación de proteínas interviene en numerosos procesos celulares esenciales. Por tanto, es importante la caracterización estructural y funcional de estas PTM en las áreas de investigación de la glucómica y la glucoproteómica, en rápido crecimiento.

Uno de los retos más destacados asociado con estas disciplinas es la presencia subestequiométrica de la glucosilación, debida a la sustancial heterogeneidad de los carbohidratos ligados (llamados colectivamente glucanos), así como a la ocupación solo parcial de un punto dado por glucanos. Por consiguiente, es esencial el fraccionamiento y el enriquecimiento de la especie glucosilada para aliviar este problema. Sin embargo, la significativa hidrofilia asociada con estas biomoléculas, como consecuencia de los numerosos grupos hidroxilo del glucano, limita el uso de las técnicas cromatográficas tradicionales, como la cromatografía de líquidos de fase inversa (RPLC).

Las ventajas de la tecnología HILIC

En contraste, la HILIC (cromatografía líquida de interacción hidrófila) es una técnica cromatográfica atractiva para el análisis de estos glucoconjugados. Entre sus aplicaciones se cuentan la detección mediante espectrometría de masa (MS) para beneficiarse de su alta sensibilidad, precisión y resolución, así como su elevado potencial de rendimiento. Se dispone de diversas fases estacionarias para la HILIC con diferentes grupos funcionales; para la fase móvil, suelen emplearse disolventes con una elevada concentración de componente orgánico (40-97%) en agua. Ya que puede ser difícil disolver los glucanos y los glucopéptidos si la cantidad de componente orgánico es muy elevada, a menudo se utiliza un 80% de contenido orgánico en la fase móvil como condición de partida.

El acetonitrilo es, de lejos, el modificador orgánico más popular. Para hidratar la fase estacionaria y generar resultados reproducibles, debe haber al menos un 3 % de agua. Los tampones apropiados son las sales amónicas de acetato y formiato debido a su volatilidad y su excelente solubilidad en disolventes orgánicos. Se ha constatado que estas sales minimizan las interacciones electrostáticas (repulsiones o atracciones) entre las fases estacionarias cargadas y los analitos, como los ácidos siálicos que contienen glucoconjugados. El formiato y otros ácidos débiles son aditivos de fase móvil habituales para ajustar el pH cuando se emplean configuraciones en línea de HILIC-MS. En la figura siguiente se muestra una visión de conjunto de las dinámicas de trabajo típicas en glucómica y glucoproteómica.

Dinámicas de trabajo típicas en glucoproteómica y glucómica

Las etapas en las que interviene la HILIC están resaltadas en rojo.